第 ３ ２ 卷 第 ９ 期 ２ ０ １ ９ 年 ９ 月 环 境 科 学 研 究 Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｏ ｆ Ｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ Ｖ ｏ ｌ . ３ ２ ꎬ Ｎ ｏ . ９ Ｓ ｅ ｐ . ꎬ ２ ０ １ ９ 收 稿 日 期 ２ ０ １ ８ ￣ ０ ３ ￣ ２ ６ 修 订 日 期 ２ ０ １ ９ ￣ ０ １ ￣ １ ８ 作 者 简 介 王 怡 １ ９ ９ ５ ￣ ꎬ 女 ꎬ 湖 北 武 汉 人 ꎬ ５ ４ ２ ３ ４ ３ ２ ６ ９ ＠ ｑ ｑ . ｃ ｏ ｍ . ∗ 责 任 作 者 ꎬ 何 冬 兰 １ ９ ６ ４ ￣ ꎬ 女 ꎬ 湖 北 武 汉 人 ꎬ 教 授 ꎬ 硕 士 ꎬ 主 要 从 事 微 生 物 资 源 的 开 发 与 利 用 研 究 ꎬ ｈ ｄ ｌ ＠ ｍ ａ ｉ ｌ . ｓ ｃ ｕ ｅ ｃ . ｅ ｄ ｕ . ｃ ｎ 基 金 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 Ｎ ｏ . ３ １ ０ ７ ０ ０ ８ ７ Ｓ ｕ ｐ ｐ ｏ ｒ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｆ ｏ ｕ ｎ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ｎ ｏ . ３ １ ０ ７ ０ ０ ８ ７ 基 于 Ｍ ｉ Ｓ ｅ ｑ 测 序 分 析 酸 性 农 作 物 土 壤 细 菌 群 落 结 构 与 多 样 性 王 怡 ꎬ 常 彬 河 ꎬ 刘 月 ꎬ 梁 建 军 ꎬ 薛 芷 筠 ꎬ 张 泽 文 ꎬ 何 冬 兰 ∗ 中 南 民 族 大 学 ꎬ 湖 北 省 微 生 物 资 源 与 利 用 工 程 技 术 研 究 中 心 ꎬ 湖 北 武 汉 ４ ３ ０ ０ ７ ４ 摘 要 为 分 析 酸 性 农 田 土 壤 中 微 生 物 群 落 结 构 ꎬ 探 寻 酸 化 土 壤 的 综 合 治 理 途 径 ꎬ 以 湖 北 恩 施 土 家 族 苗 族 自 治 州 利 川 市 酸 性 农 作 物 土 壤 为 研 究 对 象 ꎬ 应 用 Ｉ ｌ ｌ ｕ ｍ ｉ ｎ ａ Ｍ ｉ Ｓ ｅ ｑ 高 通 量 测 序 技 术 ꎬ 测 定 酸 性 土 壤 中 总 细 菌 和 经 驯 化 的 可 培 养 细 菌 的 １ ６ Ｓ ｒ Ｒ Ｎ Ａ 基 因 Ｖ ３ Ｖ ４ 变 异 区 序 列 ꎬ 确 定 不 同 农 作 物 土 壤 中 总 细 菌 和 可 培 养 细 菌 的 群 落 结 构 ꎬ 并 探 讨 土 壤 理 化 因 子 对 土 壤 总 细 菌 群 落 结 构 的 影 响 . 结 果 表 明 白 菜 地 、 烟 草 地 、 山 药 地 、 草 莓 地 、 玉 米 地 及 莴 苣 地 这 ６ 种 农 作 物 土 壤 中 总 细 菌 和 可 培 养 细 菌 在 ９ ７ ％ 的 相 似 水 平 下 得 到 的 Ｏ Ｔ Ｕ ｓ ｏ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｔ ａ ｘ ｏ ｎ ｏ ｍ ｉ ｃ ｕ ｎ ｉ ｔ ｓ ꎬ 操 作 分 类 单 元 数 量 分 别 为 ４ ０ ０ ８ 和 ９ ７ 个 . 在 门 水 平 上 ꎬ 土 壤 总 细 菌 中 有 １ ２ 个 门 类 的 细 菌 相 对 丰 度 大 于 １ ％ ꎬ Ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ 、 Ａ ｃ ｉ ｄ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ 和 Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｆ ｌ ｅ ｘ ｉ 为 优 势 菌 门 细 菌 ꎻ 可 培 养 细 菌 中 仅 有 ３ 个 门 类 细 菌 相 对 丰 度 高 于 １ ％ ꎬ 即 Ｆ ｉ ｒ ｍ ｉ ｃ ｕ ｔ ｅ ｓ 、 Ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ 和 Ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｏ ｉ ｄ ｅ ｔ ｅ ｓ . 在 Ｏ Ｔ Ｕ 水 平 上 ꎬ 土 壤 总 细 菌 沿 ｐ Ｈ 梯 度 将 ６ 种 土 壤 样 品 分 为 ２ 类 ꎬ 即 ｐ Ｈ ５ 􀆰 ５ 的 烟 草 地 、 白 菜 地 和 草 莓 地 . 此 外 ꎬ 冗 余 分 析 Ｒ Ｄ Ａ 结 果 显 示 ꎬ Ａ ｃ ｉ ｄ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ 的 相 对 丰 度 与 ｐ Ｈ 呈 正 相 关 ꎬ Ｆ ｉ ｒ ｍ ｉ ｃ ｕ ｔ ｅ ｓ 和 Ｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ 的 相 对 丰 度 均 与 ｗ Ｔ Ｎ 、 ｗ Ｔ Ｐ 、 ｗ Ｔ Ｃ 呈 正 相 关 . 系 统 进 化 树 分 析 表 明 ꎬ 相 对 丰 度 位 于 前 ３ ０ 位 的 细 菌 与 亚 洲 地 区 发 现 细 菌 的 １ ６ Ｓ ｒ Ｒ Ｎ Ａ 基 因 序 列 同 源 性 较 高 . 研 究 显 示 ꎬ Ｉ ｌ ｌ ｕ ｍ ｉ ｎ ａ Ｍ ｉ Ｓ ｅ ｑ 测 序 能 够 较 为 全 面 地 解 析 酸 性 土 壤 中 总 细 菌 和 可 培 养 细 菌 的 多 样 性 ꎬ 驯 化 过 程 极 大 地 减 少 了 细 菌 的 种 类 ꎻ 同 时 ꎬ 发 现 细 菌 群 落 结 构 的 相 似 性 可 能 因 样 本 来 源 的 地 理 距 离 的 增 加 而 衰 减 . 关 键 词 酸 性 土 壤 ꎻ Ｍ ｉ Ｓ ｅ ｑ 测 序 ꎻ 理 化 因 子 ꎻ 细 菌 群 落 ꎻ 可 培 养 细 菌 ꎻ 土 壤 总 细 菌 中 图 分 类 号 Ｘ １ ７ １ 文 章 编 号 １ ０ ０ １ ￣ ６ ９ ２ ９ ２ ０ １ ９ ０ ９ ￣ １ ５ ７ ５ ￣ ０ ９ 文 献 标 志 码 Ａ Ｄ Ｏ Ｉ １ ０ 􀆰 １ ３ １ ９ ８ ∕ ｊ 􀆰 ｉ ｓ ｓ ｎ 􀆰 １ ０ ０ １ ￣ ６ ９ ２ ９ 􀆰 ２ ０ １ ９ 􀆰 ０ １ 􀆰 ０ ６ Ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ Ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ Ｃ ｏ ｍ ｍ ｕ ｎ ｉ ｔ ｙ Ｃ ｏ ｍ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｄ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｉ ｎ Ａ ｃ ｉ ｄ Ｓ ｏ ｉ ｌ Ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ Ｍ ｉ Ｓ ｅ ｑ Ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｇ Ｗ Ａ Ｎ Ｇ Ｙ ｉ ꎬ Ｃ Ｈ Ａ Ｎ Ｇ Ｂ ｉ ｎｈ ｅ ꎬ Ｌ Ｉ Ｕ Ｙ ｕ ｅ ꎬ Ｌ Ｉ Ａ Ｎ Ｇ Ｊ ｉ ａ ｎ ｊ ｕ ｎ ꎬ Ｘ Ｕ Ｅ Ｚ ｈｉ ｊ ｕｎ ꎬ Ｚ Ｈ Ａ Ｎ Ｇ Ｚ ｅ ｗ ｅ ｎ ꎬ Ｈ Ｅ Ｄ ｏ ｎｇ ｌ ａ ｎ ∗ Ｈ ｕ ｂ ｅ ｉ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ａ ｌ Ｒ ｅ ｓ ｏ ｕ ｒ ｃ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ Ｕ ｔ ｉ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ꎬ Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈ ￣ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｆ ｏ ｒ Ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ꎬ Ｗ ｕ ｈ ａ ｎ ４ ３ ０ ０ ７ ４ ꎬ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｉ ｎ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍ ｉ ｎ ｅ ｔ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ａ ｌ ｃ ｏ ｍ ｍ ｕ ｎ ｉ ｔ ｙ ｃ ｏ ｍ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｃ ｆ ａ ｒ ｍ ｌ ａ ｎ ｄ ｓ ｏ ｉ ｌ ａ ｎ ｄ ｅ ｘ ｐ ｌ ｏ ｒ ｅ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｍ ｐ ｒ ｅ ｈ ｅ ｎ ｓ ｉ ｖ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｆ ｉ ｅ ｄ ｓ ｏ ｉ ｌ ꎬ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｃ ｓ ｏ ｉ ｌ ｓ ａ ｍ ｐ ｌ ｅ ｓ ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｌ ｉ ｃ ｈ ｕ ａ ｎ Ｃ ｉ ｔ ｙ ꎬ Ｅ ｎ ｓ ｈ ｉ Ｔ ｕ ｊ ｉ ａ ａ ｎ ｄ Ｍ ｉ ａ ｏ Ａ ｕ ｔ ｏ ｎ ｏ ｍ ｏ ｕ ｓ Ｐ ｒ ｅ ｆ ｅ ｃ ｔ ｕ ｒ ｅ ꎬ Ｈ ｕ ｂ ｅ ｉ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ꎬ ｗ ｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ａ ｓ ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｓ ꎬ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ １ ６ Ｓ ｒ Ｒ Ｎ Ａ ｇ ｅ ｎ ｅ Ｖ ３ ￣ Ｖ ４ ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｂ ｌ ｅ ｒ ｅ ｇ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ａ ｎ ｄ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｂ ｌ ｅ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｉ ｎ ｅ ａ ｃ ｈ ｓ ｏ ｉ ｌ ｓ ａ ｍ ｐ ｌ ｅ ｗ ｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ｄ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ Ｉ ｌ ｌ ｕ ｍ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｇ . Ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｉ ｓ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ꎬ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ｓ ｏ ｉ ｌ ｐ ｈ ｙ ｓ ｉ ｃ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ ｐ ｒ ｏ ｐ ｅ ｒ ｔ ｉ ｅ ｓ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｍ ｍ ｕ ｎ ｉ ｔ ｙ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｕ ｒ ｅ ｏ ｆ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｉ ｎ ｓ ｏ ｉ ｌ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｄ . Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｄ ｅ ｍ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ４ ０ ０ ８ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ａ ｎ ｄ ９ ７ Ｏ Ｔ Ｕ ｓ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｂ ｌ ｅ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ ｃ ａ ｂ ｂ ａ ｇ ｅ ꎬ ｔ ｏ ｂ ａ ｃ ｃ ｏ ꎬ ｙ ａ ｍ ꎬ ｓ ｔ ｒ ａ ｗ ｂ ｅ ｒ ｒ ｙ ꎬ ｍ ａ ｉ ｚ ｅ ａ ｎ ｄ ｌ ｅ ｔ ｔ ｕ ｃ ｅ ａ ｔ ９ ７ ％ ｓ ｉ ｍ ｉ ｌ ａ ｒ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ｗ ｅ ｒ ｅ ｆ ｏ ｕ ｎ ｄ . Ａ ｔ ｐ ｈ ｙ ｌ ｕ ｍ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ꎬ １ ２ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｓ ｗ ｈ ｏ ｓ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｂ ｕ ｎ ｄ ａ ｎ ｃ ｅ ｗ ｅ ｒ ｅ ｍ ｏ ｒ ｅ ｔ ｈ ａ ｎ １ ％ ꎬ ｗ ｈ ｉ ｌ ｓ ｔ Ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ꎬ Ａ ｃ ｉ ｄ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ꎬ ａ ｎ ｄ Ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｆ ｌ ｅ ｘ ｉ ｗ ｅ ｒ ｅ ｔ ｈ ｅ ｄ ｏ ｍ ｉ ｎ ａ ｎ ｔ ｐ ｈ ｙ ｌ ａ . Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｗ ｅ ｒ ｅ ｏ ｎ ｌ ｙ ３ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｂ ｌ ｅ ｐ ｈ ｙ ｌ ａ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｗ ｈ ｏ ｓ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｂ ｕ ｎ ｄ ａ ｎ ｃ ｅ ｗ ｅ ｒ ｅ ｍ ｏ ｒ ｅ ｔ ｈ ａ ｎ １ ％ ꎬ ｎ ａ ｍ ｅ ｌ ｙ Ｆ ｉ ｒ ｍ ｉ ｃ ｕ ｔ ｅ ｓ ꎬ Ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ａ ｎ ｄ Ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｏ ｉ ｄ ｅ ｔ ｅ ｓ . Ａ ｔ Ｏ Ｔ Ｕ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ꎬ ｓ ｏ ｉ ｌ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｃ ｏ ｕ ｌ ｄ ｂ ｅ ｄ ｉ ｖ ｉ ｄ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ ｔ ｗ ｏ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ｓ ａ ｃ ｒ ｏ ｓ ｓ ｐ Ｈ ｇ ｒ ａ ｄ ｉ ｅ ｎ ｔ ｐ Ｈ ５ 􀆰 ５ ｔ ｏ ｂ ａ ｃ ｃ ｏ ꎬ ｃ ａ ｂ ｂ ａ ｇ ｅ ａ ｎ ｄ ｓ ｔ ｒ ａ ｗ ｂ ｅ ｒ ｒ ｙ ｆ ｉ ｅ ｌ ｄ ｓ . Ｒ Ｄ Ａ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｅ ｘ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ａ ｂ ｕ ｎ ｄ ａ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ Ａ ｃ ｉ ｄ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｗ ａ ｓ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ ｐ Ｈ ꎬ ｗ ｈ ｉ ｌ ｅ ｔ ｈ ｅ ａ ｂ ｕ ｎ ｄ ａ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ Ｆ ｉ ｒ ｍ ｉ ｃ ｕ ｔ ｅ ｓ ｏ ｒ Ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｗ ａ ｓ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ ｗ Ｔ Ｎ ꎬ ｗ Ｔ Ｐ ꎬ ｗ Ｔ Ｃ . Ｔ ｈ ｅ ｐ ｈ ｙ ｌ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ｔ ｒ ｅ ｅ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｔ ｏ ｐ ３ ０ Ｏ Ｔ Ｕ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｈ ａ ｄ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｈ ｏ ｍ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ １ ６ Ｓ ｒ Ｒ Ｎ Ａ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｆ ｏ ｕ ｎ ｄ ｉ ｎ Ａ ｓ ｉ ａ . Ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ Ｉ ｌ ｌ ｕ ｍ ｉ ｎ ａ Ｍ ｉ Ｓ ｅ ｑ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｇ ｃ ａ ｎ ｃ ｏ ｍ ｐ ｒ ｅ ｈ ｅ ｎ ｓ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｄ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ａ ｎ ｄ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｂ ｌ ｅ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｉ ｎ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｃ ｓ ｏ ｉ ｌ ｓ ꎬ 环 境 科 学 研 究 第 ３ ２ 卷 ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｄ ｏ ｍ ｅ ｓ ｔ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ｇ ｒ ｅ ａ ｔ ｌ ｙ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｅ ｓ ｔ ｈ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ꎬ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｓ ａ ｍ ｅ ｔ ｉ ｍ ｅ ꎬ ｔ ｈ ｅ ｓ ｉ ｍ ｉ ｌ ａ ｒ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ｃ ｏ ｍ ｍ ｕ ｎ ｉ ｔ ｙ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｕ ｒ ｅ ｍ ａ ｙ ｄ ｅ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｏ ｆ ｇ ｅ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｉ ｃ ｄ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ . Ｋ ｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｏ ｉ ｌ ꎻ Ｍ ｉ Ｓ ｅ ｑ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｇ ꎻ ｐ ｈ ｙ ｓ ｉ ｃ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｓ ꎻ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ｃ ｏ ｍ ｍ ｕ ｎ ｉ ｔ ｙ ꎻ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｂ ｌ ｅ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ꎻ ｓ ｏ ｉ ｌ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ土 壤 酸 化 是 全 世 界 面 临 的 最 大 的 农 业 环 境 问 题 之 一 [ １ ] . Ｇ Ｕ Ｏ 等 [ ２ ] 研 究 表 明 ꎬ 我 国 有 ９０ ％ 的 农 田 土 壤 发 生 了 不 同 程 度 的 酸 化 现 象 ꎬ 土 壤 ｐＨ 平 均 值 下 降 了 ０􀆰 １３ ０ 􀆰 ８ 个 单 位 [ ３ ] . 我 国 南 方 土 壤 酸 化 问 题 更 加 突 出 ꎬ 大 部 分 土 壤 ｐ Ｈ 低 于 ５ 􀆰 ５ [ ４ ] . 自 ２０ 世 纪 ８０ 年 代 初 以 来 ꎬ 人 为 活 动 如 酸 性 气 体 排 放 和 氨 氮 化 肥 滥 用 加 快 了 土 壤 酸 化 的 速 度 [ ２ ꎬ ５ ] . 酸 性 土 壤 引 起 土 壤 矿 质 元 素 不 足 和 铝 含 量 偏 高 ꎬ 进 而 影 响 作 物 生 长 [ ６ ￣ ７ ] 和 土 壤 微 生 物 活 动 [ ８ ] . 此 外 ꎬ 耕 作 致 使 土 壤 理 化 性 质 发 生 变 化 ꎬ 从 而 使 微 生 物 群 落 发 生 改 变 [ ９ ] . 土 壤 微 生 物 是 土 壤 的 重 要 组 成 成 分 ꎬ 对 生 物 地 球 化 学 循 环 以 及 对 植 物 生 长 和 气 候 调 节 等 陆 地 生 态 系 统 的 生 态 功 能 起 着 不 可 替 代 的 作 用 [ １ ０ ] . 土 壤 微 生 物 群 落 变 化 在 一 定 程 度 上 可 以 反 映 土 壤 质 量 的 变 化 趋 势 [ １ １ ] ꎬ 土 壤 ｐ Ｈ 等 理 化 因 子 是 影 响 微 生 物 种 类 和 数 量 的 重 要 因 素 [ ８ ꎬ １ １ ] . 细 菌 是 土 壤 中 含 量 最 丰 富 、 分 布 最 广 泛 的 微 生 物 类 群 ꎬ 其 广 泛 参 与 土 壤 营 养 物 质 的 循 环 过 程 [ １ ２ ] ꎬ 因 而 具 有 巨 大 的 开 发 利 用 价 值 . Ｉ ｌ ｌ ｕｍ ｉ ｎａ 公 司 开 发 的 Ｍ ｉ Ｓ ｅ ｑ 高 通 量 测 序 技 术 避 免 了 通 量 低 、 准 确 率 低 及 操 作 复 杂 等 问 题 [ １ ３ ] ꎬ 较 传 统 的 ４５ ４ 焦 磷 酸 测 序 法 更 适 合 分 析 环 境 中 细 菌 群 落 结 构 多 样 性 [ １ ４ ] . 该 研 究 所 用 土 壤 采 集 自 湖 北 恩 施 土 家 族 苗 族 自 治 州 利 川 市 农 作 物 田 间 ꎬ 由 于 土 壤 酸 化 ꎬ 该 地 农 作 物 长 势 不 好 . 有 鉴 于 此 ꎬ 笔 者 拟 探 索 土 壤 酸 化 对 土 壤 细 菌 群 落 结 构 的 影 响 ꎬ 因 而 在 试 验 中 不 考 虑 作 物 的 种 植 类 型 、 轮 作 方 式 、 管 理 历 史 、 施 肥 处 理 和 农 药 施 加 对 土 壤 里 细 菌 群 落 的 影 响 ꎬ 仅 考 虑 不 同 ｐＨ 土 壤 中 细 菌 群 落 结 构 与 土 壤 理 化 性 质 的 关 系 . 该 研 究 通 过 Ｉ ｌ ｌ ｕｍ ｉ ｎ ａ Ｍ ｉ Ｓｅ ｑ 测 序 技 术 分 析 酸 性 土 壤 总 细 菌 和 可 培 养 细 菌 的 群 落 结 构 ꎬ 探 讨 土 壤 理 化 因 子 对 细 菌 群 落 结 构 的 影 响 ꎬ 以 期 为 酸 性 土 壤 的 治 理 和 适 种 作 物 的 选 取 提 供 指 导 ꎬ 同 时 为 从 酸 性 土 壤 中 定 向 筛 选 耐 酸 性 的 可 培 养 细 菌 提 供 数 据 基 础 和 理 论 依 据 . １ 材 料 与 方 法 １􀆰 １ 土 样 采 集 与 处 理 所 用 土 壤 于 ２０ １６ 年 ６ 月 采 集 自 湖 北 恩 施 土 家 族 苗 族 自 治 州 利 川 市 ２９ ４２ ′ Ｎ 、 １０８ ２ １ ′ Ｅ 的 白 菜 地 、 烟 草 地 、 山 药 地 、 草 莓 地 、 玉 米 地 以 及 莴 苣 地 . 将 土 样 分 为 两 份 一 份 于 室 内 风 干 ꎬ 分 别 过 １ 和 ０􀆰 １５ ｍ ｍ 的 筛 子 ꎬ 用 于 土 壤 理 化 因 子 分 析 ꎻ 另 一 份 保 存 于 － ８０ ℃ 冰 箱 中 ꎬ 用 于 后 续 总 Ｄ Ｎ Ａ 的 提 取 和 土 壤 理 化 因 子 的 测 定 . １ 􀆰 ２ 土 壤 理 化 性 质 的 测 定 土 壤 ｐＨ 采 用 ｐＨ 计 测 定 ꎬ 调 节 水 土 比 Ｖ ∶ ｍ 分 别 为 ２􀆰 ５ ∶ １ 和 ５ ∶ １ . 土 壤 中 ｗ Ｔ Ｃ 采 用 重 铬 酸 钾 容 量 法 ￣ 外 加 热 法 测 定 ꎻ ｗ Ｔ Ｎ 采 用 半 微 量 凯 氏 法 测 定 ꎻ ｗ Ｔ Ｐ 采 用 碱 熔 ￣ 钼 锑 抗 分 光 光 度 法 测 定 ꎻ ｗ Ｔ Ａ ｌ 采 用 电 感 耦 合 等 离 子 体 发 射 光 谱 法 测 定 ꎻ ｗ Ｔ Ｃ ａ 采 用 氢 氟 酸 ￣ 高 氯 酸 消 解 法 测 定 [ １ ５ ] . １ 􀆰 ３ 总 Ｄ Ｎ Ａ 的 提 取 与 １６ Ｓ ｒ Ｒ Ｎ Ａ 基 因 的 扩 增 称 取 ５ ｇ 土 壤 样 品 ꎬ 分 别 加 入 ３００ ｍ Ｌ 牛 肉 膏 蛋 白 胨 培 养 基 牛 肉 膏 ３ ｇ ∕ Ｌ ꎬ 蛋 白 胨 １０ ｇ ∕ Ｌ ꎬ Ｎ ａ Ｃ ｌ ５ ｇ ∕ Ｌ ꎬｐＨ 为 ７􀆰 ０ ７ 􀆰 ２ 中 ꎬ 于 ３０ ℃ 、 １ ８０ ｒ ∕ ｍ ｉ ｎ 下 培 养 ７ ｄ . 采 用 土 壤 基 因 组 Ｄ Ｎ Ａ 提 取 试 剂 盒 Ｓｏ ｌ ａ ｒ ｂｉ ｏ ꎬ 北 京 索 莱 宝 科 技 有 限 公 司 提 取 各 驯 化 培 养 液 中 细 菌 总 Ｄ Ｎ Ａ ꎬ 此 即 为 可 培 养 细 菌 的 总 Ｄ Ｎ Ａ . 另 外 ꎬ 称 取 ０􀆰 ５ ｇ 左 右 的 土 壤 样 品 ꎬ 使 用 土 壤 基 因 组 Ｄ Ｎ Ａ 提 取 试 剂 盒 提 取 土 壤 中 总 Ｄ Ｎ Ａ . 使 用 含 ｅ ｒ ｒ ｏ ｒ ￣ ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎｇ ｂａ ｒ ｃ ｏ ｄｅ ｓ 的 细 菌 通 用 引 物 ３ ３８ Ｆ ５ ′ ￣ Ａ Ｃ Ｔ Ｃ Ｃ Ｔ Ａ Ｃ Ｇ Ｇ Ｇ Ａ Ｇ Ｇ Ｃ Ａ Ｇ Ｃ Ａ ￣ ３ ′ 和 ８ ０ ６ Ｒ ５ ′ ￣ Ｇ Ｇ Ａ Ｃ Ｔ Ａ Ｃ Ｈ Ｖ Ｇ Ｇ Ｇ Ｔ Ｗ Ｔ Ｃ Ｔ Ａ Ａ Ｔ ￣ ３′ [ １ ６ ] 来 扩 增 细 菌 １ ６ Ｓ ｒ Ｒ Ｎ Ａ 基 因 片 段 . ２ ５ μ Ｌ Ｐ Ｃ Ｒ 反 应 体 系 １ μ Ｌ 总 Ｄ Ｎ Ａ ꎬ ５ μ Ｌ ５ Ｆ ａ ｓ ｔ ｐｆ ｕ Ｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ ꎬ １ μ Ｌ ｄＮ Ｔ Ｐ ｓ ２ 􀆰 ５ ｍ ｍ ｏ ｌ ∕ Ｌ ꎬ １ μ Ｌ 正 向 引 物 ５ μ ｍ ｏ ｌ ∕ Ｌ ꎬ １ μ Ｌ 反 向 引 物 ５ μ ｍ ｏ ｌ ∕ Ｌ ꎬ ０􀆰 ５ μ Ｌ Ｔ ｒ ａ ｎｓ Ｓ ｔ ａ ｒ ｔ Ｆ ａ ｓ ｔ ｐｆ ｕ Ｄ Ｎ Ａ Ｐ ｏ ｌ ｙ ｍ ｅ ｒ ａ ｓ ｅ ２􀆰 ５ Ｕ ∕ μ Ｌ ꎬ １ ５􀆰 ５ μ Ｌ ｄｄ Ｈ ２ Ｏ . Ｐ Ｃ Ｒ 仪 Ａ Ｂ Ｉ ９ ７００ ꎬ Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍ ｏ ꎬ Ｕ ＳＡ 进 行 ꎬ 反 应 程 序 ９５ ℃ 预 变 性 ３ ｍ ｉ ｎ ꎻ ９５ ℃ 变 性 ３ ０ ｓ ꎬ ５ ６ ℃ 退 火 ３０ ｓ ꎬ ７ ２ ℃ 延 伸 １ ｍ ｉ ｎ ꎬ 共 ２５ 个 循 环 ꎻ ７２ ℃ 延 伸 １０ ｍ ｉ ｎ . Ｐ Ｃ Ｒ 产 物 经 １ ％ 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测 后 ꎬ 使 用 Ａ ｘ ｙ Ｐ ｒ ｅ ｐ Ｄ Ｎ Ａ Ｇ ｅ ｌ Ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｋ ｉ ｔ Ａ ｘ ｙ Ｐ ｒ ｅ ｐ ꎬ 杭 州 切 胶 回 收 Ｐ Ｃ Ｒ 产 物 . 采 用 Ｑ ｕａ ｎ ｔ ｉ Ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ Ｔ Ｍ ￣ Ｓ Ｔ Ｐ ｒ ｏ ｍ ｅ ｇ ａ ꎬ Ｕ ＳＡ 蓝 色 荧 光 定 量 系 统 定 量 检 测 Ｐ Ｃ Ｒ 产 物 浓 度 . 按 照 每 个 样 本 测 序 量 要 求 ꎬ 根 据 精 确 定 量 结 果 进 行 相 应 比 例 的 混 合 ꎬ 建 立 复 制 子 文 库 ꎬ 使 用 Ｉ ｌ ｌ ｕｍ ｉ ｎａ Ｍ ｉ Ｓｅ ｑ 平 台 进 行 高 通 量 测 序 . １ 􀆰 ４ 数 据 处 理 使 用 Ｍ ｏ ｔ ｈｕ ｒ 软 件 对 Ｉ ｌ ｌ ｕｍ ｉ ｎａ 测 序 结 果 进 行 分 析 [ １ ７ ] ꎬ 去 掉 测 序 质 量 不 好 的 序 列 ꎬ 删 除 长 度 小 于 ２ ０ ０ ｂｐ 的 序 列 ꎬ 并 根 据 序 列 两 端 ｂａ ｒ ｃ ｏ ｄｅ 和 引 物 区 分 样 ６ ７ ５ １第 ９ 期 王 怡 等 基 于 Ｍ ｉ Ｓ ｅ ｑ 测 序 分 析 酸 性 农 作 物 土 壤 细 菌 群 落 结 构 与 多 样 性 品 ꎬ 去 掉 引 物 序 列 和 ｂ ａ ｒ ｃ ｏ ｄ ｅ ｓ 序 列 ꎬ 最 终 得 到 有 效 的 序 列 文 件 . 采 用 Ｕ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ 平 台 ｖ ７􀆰 １ ꎬ ｈ ｔ ｔ ｐ ∕ ∕ ｄｒ ｉ ｖ ｅ ５ . ｃ ｏ ｍ 对 所 有 序 列 进 行 Ｏ Ｔ Ｕ ｓ ｏ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｔ ａ ｘ ｏ ｎｏ ｍ ｉ ｃ ｕ ｎｉ ｔ ｓ ꎬ 操 作 分 类 单 元 划 分 ꎬ 采 用 Ｒ Ｄ Ｐ ｃ ｌ ａ ｓ ｓ ｉ ｆ ｉ ｅ ｒ 贝 叶 斯 算 法 对 ９７ ％ 相 似 水 平 的 Ｏ Ｔ Ｕ 代 表 序 列 进 行 分 类 学 分 析 ꎬ 比 对 数 据 库 采 用 ＳＩ Ｌ Ｖ Ａ ｖ １１１ １ ６ Ｓ ｒ Ｒ Ｎ Ａ 参 考 数 据 库 ｈ ｔ ｔ ｐ ∕ ∕ ｗ ｗ ｗ . ａ ｒ ｂ ｓ ｉ ｌ ｖ ａ . ｄｅ . 利 用 Ｍ ｏ ｔ ｈｕｒ 软 件 计 算 Ａ ｌ ｐ ｈａ 多 样 性 指 数 ꎬ 如 菌 群 Ｃ ｈ ａ ｏ １ 丰 度 指 数 [ １ ８ ] 、 Ｓｈ ａ ｎ ｎｏ ｎ ￣ Ｗ ｉ ｅ ｎｅ ｒ 多 样 性 指 数 [ １ ９ ] 、 Ｇ ｏ ｏ ｄ ′ ｓ Ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ａ ｇ ｅ 测 序 深 度 指 数 [ ２ ０ ] 等 . 对 于 Ｂ ｅ ｔ ａ 多 样 性 分 析 ꎬ 使 用 Ｂ ｒ ａ ｙ ￣ Ｃ ｕｒ ｔ ｉ ｓ 矩 阵 对 计 算 得 到 的 Ｏ Ｔ Ｕ 组 成 及 丰 度 ꎬ 构 建 多 样 本 相 似 性 水 平 系 统 进 化 树 图 . 采 用 Ａ ｎｏ ｓ ｉ ｍ 相 似 性 分 析 探 究 土 壤 总 细 菌 与 可 培 养 细 菌 群 落 结 构 的 差 异 性 ꎬ 其 中 差 异 指 数 Ｒ 计 算 公 式 为 Ｒ ＝ ４ ｒ ｂ － ｒ ｗ ∕ [ ｎ ｎ － １ ] １ 式 中 ꎬ ｒ ｂ 为 组 间 差 异 秩 的 平 均 值 ꎬ ｒ ｗ 为 组 内 差 异 秩 的 平 均 值 ꎬ ｎ 为 总 的 样 本 个 数 . 使 用 ＳＰ Ｓ Ｓ Ｉ Ｂ Ｍ ＳＰ ＳＳ Ｓ ｔ ａ ｔ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ２５ 􀆰 ０􀆰 ０ 软 件 确 定 土 壤 理 化 因 子 与 土 壤 总 细 菌 门 水 平 上 细 菌 相 对 丰 度 的 Ｓ ｐ ｅ ａ ｒ ｍ ａ ｎ 相 关 性 ꎬ 并 使 用 Ｒ 语 言 的 ｈｅ ａ ｔ ｍ ａ ｐ 函 数 构 建 二 者 的 热 图 . 使 用 Ｖ ｅ ｇ ａ ｎ 包 对 土 壤 理 化 因 子 进 行 Ｂ ｉ ｏ ｅ ｎ ｖ 分 析 ꎬ 寻 找 最 佳 的 理 化 因 子 组 合 ꎬ 随 后 使 用 Ｃ ａ ｎｏ ｃ ｏ ５ 软 件 构 建 细 菌 多 样 性 与 土 壤 理 化 因 子 的 相 关 性 . 使 用 Ｍ Ｅ Ｇ Ａ ６ 软 件 [ ２ １ ] 构 建 ｎｅ ｉ ｇ ｈｂ ｏ ｒ ￣ ｊ ｏ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ 系 统 进 化 树 ꎬ 用 以 确 定 丰 度 较 高 Ｏ Ｔ Ｕ 的 生 境 关 系 . 土 壤 总 细 菌 与 可 培 养 细 菌 的 高 通 量 测 序 数 据 存 放 于 Ｎ Ｃ Ｂ Ｉ 的 Ｓｈｏ ｒ ｔ Ｒ ｅ ａ ｄ Ａ ｒ ｃ ｈｉ ｖ ｅ ＳＲ Ａ 数 据 库 中 ꎬ 序 列 号 分 别 为 ＳＲ Ｐ １０９ ８ ２４ 和 Ｓ Ｒ Ｐ １ １０５ ９１ . 将 土 壤 总 细 菌 Ｏ Ｔ Ｕ 丰 度 位 于 前 ３０ 位 的 各 序 列 上 传 至 Ｎ Ｃ Ｂ Ｉ 中 ꎬ 序 列 号 为 Ｍ Ｆ ３ ４ ７９４２ Ｍ Ｆ ３４７ ９７１ Ｏ Ｔ Ｕ １ Ｏ Ｔ Ｕ ３０ . ２ 结 果 与 讨 论 ２ 􀆰 １ 土 壤 理 化 性 质 由 表 １ 可 见 ꎬ ６ 种 农 作 物 土 壤 呈 现 出 不 同 的 酸 化 程 度 ꎬ 土 壤 ｐＨ 为 ４􀆰 ３９ ６􀆰 ６９ . 玉 米 地 和 山 药 地 土 壤 酸 化 程 度 最 为 严 重 ｐＨ ５ ꎬ 且 玉 米 地 和 山 药 地 土 壤 中 ｗ Ｔ Ａ ｌ 与 其 他 农 作 物 土 壤 相 比 明 显 较 高 Ｐ ０􀆰 ０ ５ ꎬ 而 ｗ Ｔ Ｃ ａ 几 乎 均 明 显 较 低 Ｐ ０ 􀆰 ０５ . 这 与 Ｊ Ｕ 等 [ ２ ２ ] 的 研 究 结 果 一 致 ꎬ 即 土 壤 严 重 酸 化 能 够 明 显 提 高 土 壤 中 ｗ Ｔ Ａ ｌ . 该 研 究 土 壤 中 ｗ 有 效 态 Ｃ ａ 与 ｗ 有 效 态 Ａ ｌ 呈 负 相 关 ꎬ 这 间 接 验 证 了 Ｌ ａ ｗ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ 等 [ ２ ３ ] 提 出 的 酸 沉 降 导 致 土 壤 铝 活 化 是 北 美 森 林 钙 缺 失 的 主 要 原 因 的 观 点 . ６ 种 酸 性 土 壤 中 ｗ Ｔ Ｃ 、 ｗ Ｔ Ｎ 、 ｗ Ｔ Ｐ 分 别 为 １ ６ 􀆰 ２ ２ ３ 􀆰 ９、 ２ 􀆰 １ １ ２ 􀆰 ７ ５、０ 􀆰 ５ １ ０ 􀆰 ９５ ｇ ∕ ｋｇ ꎬ 与 新 疆 乌 苏 泥 火 山 土 壤 [ ２ ４ ] 非 常 相 近 . 农 作 物 土 壤 中 氮 、 磷 及 有 机 质 的 来 源 不 仅 与 农 家 肥 或 化 肥 的 大 量 施 用 有 关 ꎬ 而 且 与 微 生 物 降 解 的 活 动 有 关 . 因 此 ꎬ 考 察 土 壤 的 理 化 性 质 能 够 正 确 指 导 作 物 的 选 育 与 耕 作 ꎬ 也 为 定 性 确 定 土 壤 微 生 物 群 落 结 构 、 利 用 微 生 物 改 变 土 壤 的 性 质 而 打 下 理 论 基 础 . 表 １ ６ 种 农 作 物 土 壤 的 理 化 性 质 Ｔ ａ ｂ ｌ ｅ １ Ｐ ｈ ｙ ｓ ｉ ｃ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ ｐ ｒ ｏ ｐ ｅ ｒ ｔ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｃ ｒ ｏ ｐ ｓ ｏ ｉ ｌ ｓ 土 壤 类 型 ｐ Ｈ ｗ ∕ ｇ ∕ ｋ ｇ Ｔ Ｎ Ｔ Ｃ Ｔ Ｐ Ｔ Ａ ｌ Ｔ Ｃ ａ 玉 米 地 ４ 􀆰 ６ ７ ０ 􀆰 ２ ４ ｃ ２ 􀆰 ３ ３ ０ 􀆰 ７ ４ ａ ２ ０ 􀆰 ６ ８ 􀆰 ３ ４ ａ ０ 􀆰 ９ ５ ０ 􀆰 １ ２ ａ １ ２ ４ 􀆰 ６ ５ 􀆰 ２ ５ ａ １ 􀆰 １ １ ０ 􀆰 ７ ２ ｂ 烟 草 地 ６ 􀆰 ６ ９ ０ 􀆰 ４ ５ ａ ２ 􀆰 １ １ ０ 􀆰 ４ ０ ａ １ ６ 􀆰 ３ ２ 􀆰 ９ ７ ａ ０ 􀆰 ５ ９ ０ 􀆰 ０ ５ ｂ ｃ ８ ６ 􀆰 ８ ９ 􀆰 ４ ７ ｂ ２ 􀆰 ７ １ ０ 􀆰 ７ １ ａ 莴 苣 地 ５ 􀆰 １ ６ ０ 􀆰 ３ ０ ｂ ｃ ２ 􀆰 ７ ５ ０ 􀆰 ２ ３ ａ ２ ３ 􀆰 ９ １ 􀆰 ４ ６ ａ ０ 􀆰 ６ １ ０ 􀆰 ０ ２ ａ ｂ ｃ ８ ５ 􀆰 ３ ３ 􀆰 ５ ２ ｂ １ 􀆰 ９ ５ ０ 􀆰 ３ ３ ａ ｂ 山 药 地 ４ 􀆰 ３ ９ ０ 􀆰 ２ ９ ｃ ２ 􀆰 ４ ４ ０ 􀆰 ５ ０ ａ ２ １ 􀆰 ０ ３ 􀆰 ３ ３ ａ ０ 􀆰 ８ ７ ０ 􀆰 １ ９ ａ ｂ １ ３ ４ 􀆰 ０ ９ 􀆰 ６ ４ ａ １ 􀆰 ６ ９ ０ 􀆰 ２ ３ ａ ｂ 白 菜 地 ６ 􀆰 ３ ４ ０ 􀆰 ５ １ ａ ｂ ２ 􀆰 ３ ６ ０ 􀆰 ２ ２ ａ １ ９ 􀆰 ９ ３ 􀆰 ７ ６ ａ ０ 􀆰 ５ ４ ０ 􀆰 ０ ６ ｂ ｃ ９ ７ 􀆰 ０ ５ 􀆰 ６ ２ ｂ ２ 􀆰 ７ ３ ０ 􀆰 ５ １ ａ 草 莓 地 ５ 􀆰 ９ ８ ０ 􀆰 ６ ８ ａ ｂ ２ 􀆰 １ １ ０ 􀆰 ４ ３ ａ １ ６ 􀆰 ２ ３ 􀆰 ３ ８ ａ ０ 􀆰 ５ １ ０ 􀆰 １ ８ ｃ １ ０ ２ 􀆰 １ ３ 􀆰 ４ ２ ｂ ２ 􀆰 ９ １ ０ 􀆰 ２ １ ａ注 试 验 结 果 为 ３ 个 重 复 试 验 的 结 果 . 同 一 列 中 不 同 字 母 代 表 显 著 性 差 异 Ｐ ０ 􀆰 ０ ５ . 下 同 . ２􀆰 ２ 细 菌 群 落 的 多 样 性 分 析 ２􀆰 ２􀆰 １ Ａ ｌ ｐ ｈａ 多 样 性 分 析 根 据 ９７ ％ 的 相 似 度 ꎬ 将 有 效 序 列 聚 类 为 用 于 物 种 分 类 的 Ｏ Ｔ Ｕ . 经 统 计 ꎬ ６ 种 农 作 物 土 壤 样 品 中 总 细 菌 共 有 ４ ００ ８ 个 Ｏ Ｔ Ｕ ꎬ 而 其 中 可 培 养 细 菌 共 有 ９７ 个 Ｏ Ｔ Ｕ ꎬ 且 平 均 测 序 读 长 分 别 为 ４ ３８ 和 ４４９ ｂ ｐ . 土 壤 总 细 菌 的 Ｃ ｈ ａ ｏ １ 丰 富 度 指 数 和 Ｓ ｈａ ｎｎｏ ｎ ￣ Ｗ ｉ ｅ ｎｅ ｒ 多 样 性 指 数 均 明 显 Ｐ ０􀆰 ０５ 高 于 可 培 养 细 菌 见 表 ２ . 由 此 表 明 ꎬ 土 壤 中 可 培 养 细 菌 种 类 在 土 壤 总 细 菌 中 的 占 比 不 足 １ ％ . 此 外 ꎬ 土 壤 总 细 菌 的 Ｏ Ｔ Ｕ 数 量 、 Ｃ ｈａ ｏ １ 丰 富 度 指 数 和 Ｓｈ ａ ｎ ｎｏ ｎ ￣ Ｗ ｉ ｅ ｎ ｅ ｒ 多 样 性 指 数 在 这 ６ 种 农 作 物 土 壤 之 间 存 在 显 著 差 异 Ｐ ０ 􀆰 ０ ５ ꎬ 表 明 ６ 种 农 作 物 土 壤 中 细 菌 的 丰 度 和 多 样 性 存 在 差 异 ꎬ 需 要 进 一 步 探 究 决 定 这 种 差 异 的 理 化 因 子 . 对 于 ６ 种 农 作 物 ７ ７ ５ １ 环 境 科 学 研 究 第 ３ ２ 卷表 ２ 不 同 土 壤 样 品 中 Ａ ｌ ｐ ｈ ａ 多 样 性 指 数 Ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ２ Ａ ｌ ｐ ｈ ａ ｄ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｉ ｎ ｄ ｅ ｘ ｉ ｎ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｓ ｏ ｉ ｌ ｓ ａ ｍ ｐ ｌ ｅ ｓ 处 理 土 壤 类 型 Ｏ Ｔ Ｕ 数 量 ∕ 个 Ｃ ｈ ａ ｏ １ 丰 富 度 指 数 Ｇ ｏ ｏ ｄ ′ ｓ Ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ａ ｇ ｅ 测 序 深