第 ３ ２ 卷 第 ７ 期 ２ ０ １ ９ 年 ７ 月 环 境 科 学 研 究 Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｏ ｆ Ｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ Ｖ ｏ ｌ . ３ ２ ꎬ Ｎ ｏ . ７ Ｊ ｕ ｌ ｙ ꎬ ２ ０ １ ９ 收 稿 日 期 ２ ０ １ ８ ￣ ０ ９ ￣ ２ ５ 修 订 日 期 ２ ０ １ ９ ￣ ０ １ ￣ ３ １ 作 者 简 介 张 京 佶 １ ９ ８ ３ ￣ ꎬ 女 ꎬ 上 海 人 ꎬ 工 程 师 ꎬ 硕 士 ꎬ 主 要 从 事 生 态 毒 理 学 研 究 ꎬ ｚ ｈ ａ ｎ ｇ ｊ ｊ ＠ ａ ｐ ｍ . ｓ ｈ . ｃ ｎ . 基 金 项 目 上 海 市 自 然 科 学 基 金 项 目 Ｎ ｏ . １ ７ Ｚ Ｒ １ ４ ２ ４ ４ ０ ０ ꎻ 上 海 市 技 术 性 贸 易 措 施 应 对 专 项 Ｎ ｏ . １ ６ Ｔ Ｂ Ｔ ０ ０ ９ Ｓ ｕ ｐ ｐ ｏ ｒ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｆ ｏ ｕ ｎ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ꎬ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ｎ ｏ . １ ７ Ｚ Ｒ １ ４ ２ ４ ４ ０ ０ ꎻ Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｂ ａ ｒ ｒ ｉ ｅ ｒ ｓ ｆ ｏ ｒ Ｔ ｒ ａ ｄ ｅ Ｐ ｒ ｏ ｇ ｒ ａ ｍ ꎬ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ｎ ｏ . １ ６ Ｔ Ｂ Ｔ ０ ０ ９ 稀 有 鮈 鲫 在 鱼 类 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 中 的 适 用 性 研 究 张 京 佶 ꎬ 王 绿 平 ꎬ 张 琨 上 海 市 检 测 中 心 生 物 与 安 全 检 测 实 验 室 ꎬ 上 海 ２ ０ １ ２ ０ ３ 摘 要 为 了 验 证 我 国 本 土 鱼 种 稀 有 鮈 鲫 Ｇ ｏ ｂ ｉ ｏ ｃ ｙ ｐ ｒ ｉ ｓ ｒ ａ ｒ ｕ ｓ 在 鱼 类 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 的 适 用 性 ꎬ 评 价 其 在 鱼 类 替 代 试 验 中 的 应 用 潜 力 ꎬ 选 取 ３ ꎬ ４ ￣ 二 氯 苯 胺 和 五 水 硫 酸 铜 ꎬ 按 照 Ｏ Ｅ Ｃ Ｄ 化 学 品 测 试 准 则 Ｎ ｏ . ２ ３ ６ 鱼 类 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 ꎬ 分 别 开 展 ６ 次 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 ꎬ 通 过 评 价 试 验 结 果 的 重 复 性 ꎬ 验 证 稀 有 鮈 鲫 是 否 适 用 于 鱼 类 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 . 结 果 表 明 ３ ꎬ ４ ￣ 二 氯 苯 胺 和 五 水 硫 酸 铜 对 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 的 ９ ６ ｈ Ｌ Ｃ ５ ０ ９ ６ ｈ 半 数 致 死 浓 度 平 均 值 ｘ 分 别 为 １ ２ 􀆰 ８ 和 １ 􀆰 ７ ６ ｍ ｇ ∕ Ｌ ꎬ 标 准 差 ｓ 分 别 为 １ 􀆰 ７ ０ 和 ０ 􀆰 １ ９ ７ ｍ ｇ ∕ Ｌ ꎻ 变 异 系 数 Ｃ Ｖ 分 别 为 １ ３ 􀆰 ３ ％ 和 １ １ 􀆰 ２ ％ ꎬ 均 小 于 ３ ０ ％ ꎻ 两 种 化 学 品 ６ 次 试 验 的 ９ ６ ｈ Ｌ Ｃ ５ ０ 均 在 各 自 ｘ ２ ｓ 范 围 内 . 研 究 显 示 ꎬ 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 的 形 态 特 征 、 发 育 过 程 及 孵 化 时 间 等 生 物 学 特 征 均 与 斑 马 鱼 类 似 ꎬ ３ ꎬ ４ ￣ 二 氯 苯 胺 和 五 水 硫 酸 铜 这 两 种 化 学 品 的 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 结 果 具 有 良 好 的 重 复 性 ꎬ 其 敏 感 性 也 与 成 鱼 类 似 . 因 此 ꎬ 稀 有 鮈 鲫 作 为 一 种 我 国 本 土 的 标 准 试 验 鱼 种 ꎬ 具 有 鱼 类 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 的 应 用 潜 力 . 关 键 词 稀 有 鮈 鲫 ꎻ 胚 胎 ꎻ 急 性 毒 性 ꎻ 重 复 性 中 图 分 类 号 Ｘ １ ７ ４ 文 章 编 号 １ ０ ０ １ ￣ ６ ９ ２ ９ ２ ０ １ ９ ０ ７ ￣ １ １ ６ ２ ￣ ０ ８ 文 献 标 志 码 Ａ Ｄ Ｏ Ｉ １ ０ 􀆰 １ ３ １ ９ ８ ∕ ｊ 􀆰 ｉ ｓ ｓ ｎ 􀆰 １ ０ ０ １ ￣ ６ ９ ２ ９ 􀆰 ２ ０ １ ９ 􀆰 ０ ２ 􀆰 ０ ８ Ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｇ ｏ ｂ ｉ ｏ ｃ ｙ ｐ ｒ ｉ ｓ ｒ ａ ｒ ｕ ｓ ｉ ｎ Ｆ ｉ ｓ ｈ Ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ Ａ ｃ ｕ ｔ ｅ Ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ Ｔ ｅ ｓ ｔ Ｚ Ｈ Ａ Ｎ Ｇ Ｊ ｉ ｎｇ ｊ ｉ ꎬ Ｗ Ａ Ｎ Ｇ Ｌ ｐ ｉ ｎｇ ꎬ Ｚ Ｈ Ａ Ｎ Ｇ Ｋ ｕｎ Ｂ ｉ ｏ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ａ ｎ ｄ Ｓ ａ ｆ ｅ ｔ ｙ Ａ ｓ ｓ ｅ ｓ ｓ ｍ ｅ ｎ ｔ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ꎬ Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ Ａ ｃ ａ ｄ ｅ ｍ ｙ ｏ ｆ Ｐ ｕ ｂ ｌ ｉ ｃ Ｍ ｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｍ ｅ ｎ ｔ ꎬ Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ２ ０ １ ２ ０ ３ ꎬ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｔ ｈ ｅ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｉ ｓ ａ ｉ ｍ ｅ ｄ ｔ ｏ ｖ ａ ｌ ｉ ｄ ａ ｔ ｅ ｗ ｈ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ ｒ ａ ｒ ｅ ｍ ｉ ｎ ｎ ｏ ｗ Ｇ ｏ ｂ ｉ ｏ ｃ ｙ ｐ ｒ ｉ ｓ ｒ ａ ｒ ｕ ｓ ｉ ｓ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｂ ｌ ｅ ｆ ｏ ｒ ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ ａ ｃ ｕ ｔ ｅ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ｔ ｅ ｓ ｔ ꎬ ａ ｎ ｄ ａ ｌ ｓ ｏ ｔ ｏ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｐ ｏ ｓ ｓ ｉ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｉ ｔ ｓ ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ ａ ｓ ａ ｎ ａ ｌ ｔ ｅ ｒ ｎ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｔ ｏ ｔ ｅ ｓ ｔ ｆ ｉ ｓ ｈ ｉ ｎ ａ ｃ ｕ ｔ ｅ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ｔ ｅ ｓ ｔ ｓ ꎬ ｗ ｈ ｉ ｃ ｈ ｌ ａ ｙ ａ ｆ ｏ ｕ ｎ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｏ ｒ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｏ ｆ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ . Ａ ｃ ｃ ｏ ｒ ｄ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ Ｏ Ｅ Ｃ Ｄ Ｇ ｕ ｉ ｄ ｅ ｌ ｉ ｎ ｅ ｓ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ Ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ Ｎ ｏ 􀆰 ２ ３ ６ Ｆ ｉ ｓ ｈ Ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ Ａ ｃ ｕ ｔ ｅ Ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ Ｔ ｅ ｓ ｔ ꎬ ｓ ｉ ｘ ｉ ｎ ｄ ｅ ｐ ｅ ｎ ｄ ｅ ｎ ｔ ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ ｔ ｅ ｓ ｔ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍ ｅ ｄ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｎ ｅ ｗ ｌ ｙ ｆ ｅ ｒ ｔ ｉ ｌ ｉ ｚ ｅ ｄ ｅ ｇ ｇ ｓ ｏ ｆ Ｇ . ｒ ａ ｒ ｕ ｓ ｔ ｈ ａ ｔ ｗ ｅ ｒ ｅ ｅ ｘ ｐ ｏ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｔ ｗ ｏ ｒ ｅ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｕ ｂ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｓ ꎬ ｉ . ｅ . ３ ꎬ ４ ￣ ｄ ｉ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ａ ｎ ｉ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｎ ｄ ｃ ｏ ｐ ｐ ｅ ｒ ｓ ｕ ｌ ｆ ａ ｔ ｅ ｐ ｅ ｎ ｔ ａ ｈ ｙ ｄ ｒ ａ ｔ ｅ ꎬ ｒ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ . Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｐ ｅ ａ ｔ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｗ ａ ｓ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ ｖ ａ ｌ ｉ ｄ ａ ｔ ｅ ｗ ｈ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ Ｇ . ｒ ａ ｒ ｕ ｓ ｗ ａ ｓ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｂ ｌ ｅ ｆ ｏ ｒ ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ ａ ｃ ｕ ｔ ｅ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ｔ ｅ ｓ ｔ . Ｔ ｈ ｅ ｍ ｅ ａ ｎ ｅ ｓ ｔ ｉ ｍ ａ ｔ ｅ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ａ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ５ ０ ％ ｍ ｏ ｒ ｔ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ Ｌ Ｃ ５ ０ ꎬ ｘ ｏ ｆ Ｇ . ｒ ａ ｒ ｕ ｓ ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ ｓ ｆ ｏ ｒ ａ ｐ ｅ ｒ ｉ ｏ ｄ ｏ ｆ ９ ６ ｈ ｗ ｅ ｒ ｅ １ ２ 􀆰 ８ ｍ ｇ ∕ Ｌ ｆ ｏ ｒ ３ ꎬ ４ ￣ ｄ ｉ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ａ ｎ ｉ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｎ ｄ １ 􀆰 ７ ６ ｍ ｇ ∕ Ｌ ｆ ｏ ｒ ｃ ｏ ｐ ｐ ｅ ｒ ｓ ｕ ｌ ｆ ａ ｔ ｅ ｐ ｅ ｎ ｔ ａ ｈ ｙ ｄ ｒ ａ ｔ ｅ ꎬ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ｉ ｒ ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｄ ｅ ｖ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ １ 􀆰 ７ ０ ａ ｎ ｄ ０ 􀆰 １ ９ ７ ｍ ｇ ∕ Ｌ ꎬ ｒ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ꎻ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｉ ｒ ｃ ｏ ｅ ｆ ｆ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｃ Ｖ ｏ ｆ Ｌ Ｃ ５ ０ ｖ ａ ｌ ｕ ｅ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ １ ３ 􀆰 ３ ％ ａ ｎ ｄ １ １ 􀆰 ２ ％ ꎬ ｗ ｈ ｉ ｃ ｈ ｗ ａ ｓ ｌ ｅ ｓ ｓ ｔ ｈ ａ ｎ ３ ０ ％ . Ｔ ｈ ｅ ９ ６ ｈ Ｌ Ｃ ５ ０ ｖ ａ ｌ ｕ ｅ ｓ ｏ ｆ ｓ ｉ ｘ ｒ ｕ ｎ ｓ ｆ ｏ ｒ ｅ ａ ｃ ｈ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ ｆ ａ ｌ ｌ ｅ ｎ ｉ ｎ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｏ ｆ ｘ ２ ｓ . Ｔ ｈ ｅ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ Ｇ . ｒ ａ ｒ ｕ ｓ ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ ｓ ｒ ｅ ｇ ａ ｒ ｄ ｉ ｎ ｇ ｍ ｏ ｒ ｐ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ꎬ ｓ ｔ ａ ｇ ｅ ｓ ｏ ｆ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ ｈ ａ ｔ ｃ ｈ ｄ ｕ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗ ｅ ｒ ｅ ｑ ｕ ｉ ｔ ｅ ｓ ｉ ｍ ｉ ｌ ａ ｒ ｔ ｏ ｔ ｈ ｏ ｓ ｅ ｏ ｆ Ｄ ａ ｎ ｉ ｏ ｒ ｅ ｒ ｉ ｏ ꎬ ａ ｎ ｄ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ｔ ｅ ｓ ｔ ｓ ｆ ｏ ｒ ｔ ｗ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ Ｇ . ｒ ａ ｒ ｕ ｓ ｅ ｇ ｇ ｓ ｐ ｒ ｅ ｓ ｅ ｎ ｔ ｅ ｄ ａ ｐ ｒ ｏ ｍ ｉ ｓ ｉ ｎ ｇ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ꎬ ｔ ｏ ｏ . Ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｉ ｎ Ｇ . ｒ ａ ｒ ｕ ｓ ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ ｓ ′ ｒ ｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｅ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｔ ｗ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｗ ａ ｓ ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ａ ｂ ｌ ｅ ｔ ｏ ｔ ｈ ａ ｔ ｏ ｆ ａ ｄ ｕ ｌ ｔ ｆ ｉ ｓ ｈ . Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｆ ｏ ｒ ｅ ꎬ ｔ ｈ ｅ ｅ ｎ ｄ ｅ ｍ ｉ ｃ ｆ ｉ ｓ ｈ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｅ ｓ ꎬ Ｇ . ｒ ａ ｒ ｕ ｓ ｃ ｏ ｕ ｌ ｄ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ａ ｓ ａ ｃ ａ ｎ ｄ ｉ ｄ ａ ｔ ｅ ｏ ｒ ｇ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｆ ｏ ｒ ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ ａ ｃ ｕ ｔ ｅ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ｔ ｅ ｓ ｔ . Ｋ ｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ Ｇ ｏ ｂ ｉ ｏ ｃ ｙ ｐ ｒ ｉ ｓ ｒ ａ ｒ ｕ ｓ ꎻ ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ ꎻ ａ ｃ ｕ ｔ ｅ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ꎻ ｒ ｅ ｐ ｅ ａ ｔ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ鱼 类 急 性 毒 性 试 验 [ １ ￣ ３ ] 是 全 球 化 学 品 环 境 管 理 中 的 基 础 测 试 ꎬ 因 其 应 用 频 次 较 高 ꎬ 在 化 学 品 生 态 毒 性 研 究 及 环 境 风 险 评 估 中 具 有 重 要 作 用 和 意 义 . 然 而 ꎬ 随 着 ３ Ｒ ｓ 原 则 〔 ｒ ｅ ｐｌ ａ ｃ ｅ ｍ ｅ ｎｔ 替 代 、 ｒ ｅ ｄｕｃ ｔ ｉ ｏ ｎ 减 少 、 ｒ ｅ ｆ ｉ ｎｅ ｍ ｅ ｎ ｔ 优 化 〕 在 哺 乳 动 物 毒 性 测 试 中 的 广 泛 推 行 [ ４ ] ꎬ 该 理 念 在 环 境 毒 理 学 领 域 的 延 伸 和 应 用 也 逐 渐 得 到 关 注 [ ５ ] . 欧 盟 已 于 ２０ ０９ 年 禁 止 使 用 脊 椎 动 物 进 行 试 验 ꎬ 并 在 ２０ １３ 年 全 面 禁 止 使 用 动 物 试 验 检 测 化 妆 品 原 料 及 成 品 的 毒 性 . 此 外 ꎬ 欧 洲 化 学 品 的 注 册 、 评 估 、 授 权 和 限 制 Ｒ Ｅ Ａ Ｃ Ｈ 法 规 也 提 倡 减 少 测第 ７ 期 张 京 佶 等 稀 有 鮈 鲫 在 鱼 类 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 中 的 适 用 性 研 究 试 中 脊 椎 动 物 的 数 量 ꎬ 推 动 非 动 物 测 试 如 胚 胎 、 细 胞 、 组 织 等 和 替 代 策 略 的 开 发 和 验 证 [ ６ ] . 因 此 ꎬ 国 际 经 济 与 合 作 组 织 Ｏ Ｅ Ｃ Ｄ 在 ２０ １３ 年 颁 布 了 鱼 类 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 方 法 Ｏ Ｅ Ｃ Ｄ Ｔ Ｇ ２３ ６ ꎬ Ｆ ｉ ｓ ｈ Ｅ ｍ ｂｒ ｙ ｏ Ａ ｃ ｕｔ ｅ Ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ Ｔ ｅ ｓ ｔ ꎬ Ｆ Ｅ Ｔ [ ７ ] 作 为 鱼 类 急 性 毒 性 试 验 的 首 选 替 代 方 法 ꎬ 该 方 法 已 于 ２ ０１２ 年 完 成 验 证 [ ８ ￣ ９ ] ꎬ 指 定 的 试 验 材 料 为 斑 马 鱼 Ｄ ａ ｎ ｉ ｏ ｒ ｅ ｒ ｉ ｏ 受 精 卵 . 采 用 鱼 类 胚 胎 进 行 毒 性 试 验 有 以 下 优 势 ① 亲 鱼 体 型 小 ꎬ 易 于 管 理 和 饲 养 . ② 产 卵 量 大 ꎬ 同 一 来 源 的 大 批 量 受 精 卵 可 满 足 统 计 学 意 义 上 的 各 类 分 析 . ③ 整 个 试 验 可 在 ２４ 孔 细 胞 板 中 完 成 ꎬ 在 节 约 空 间 和 成 本 的 同 时 ꎬ 还 减 少 了 样 品 的 用 量 和 废 液 的 排 放 . ④ 测 试 周 期 短 ꎬ 仅 为 ９６ ｈ ꎬ 与 传 统 鱼 类 急 性 毒 性 试 验 一 致 ꎬ 具 有 一 定 可 比 性 . ⑤ 斑 马 鱼 胚 胎 具 有 光 学 透 明 性 [ １ ０ ] ꎬ 可 通 过 显 微 镜 观 察 各 发 育 阶 段 的 形 态 特 征 ꎬ 定 期 观 察 各 种 效 应 指 标 致 死 或 致 畸 ꎬ 为 毒 理 学 研 究 提 供 依 据 . ⑥ 运 用 一 定 的 标 记 技 术 ꎬ 可 透 过 细 胞 膜 准 确 地 观 察 某 个 基 因 在 组 织 器 官 或 个 体 中 的 表 达 [ １ １ ] . 鱼 类 胚 胎 毒 性 试 验 不 仅 用 于 研 究 化 学 品 的 环 境 毒 性 ꎬ 还 用 于 对 污 水 、 废 水 的 监 测 和 控 制 [ １ ２ ] . 在 德 国 ꎬ 斑 马 鱼 胚 胎 已 经 作 为 水 质 监 测 的 标 准 试 验 材 料 ꎬ 取 代 了 用 成 鱼 进 行 的 毒 理 学 研 究 [ １ ３ ￣ １ ４ ] . 斑 马 鱼 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 在 技 术 上 操 作 方 便 ꎬ 试 验 结 果 重 复 性 较 高 [ １ ５ ] ꎬ 与 传 统 的 成 鱼 或 幼 鱼 的 急 慢 性 试 验 相 比 ꎬ 结 果 更 为 灵 敏 且 能 提 供 更 多 的 效 应 指 标 . 此 外 ꎬ 有 研 究 [ １ ６ ] 表 明 ꎬ 鱼 类 胚 胎 急 性 毒 性 与 成 鱼 急 性 毒 性 数 据 之 间 还 存 在 高 度 相 关 性 . 因 此 ꎬ 很 多 欧 美 国 家 已 逐 渐 避 免 使 用 成 鱼 或 幼 鱼 作 为 毒 性 研 究 材 料 ꎬ 越 来 越 多 地 改 用 胚 胎 试 验 获 取 毒 性 数 据 [ １ ７ ] . 由 于 全 球 大 部 分 的 模 式 生 物 及 相 关 的 生 态 毒 性 测 试 都 是 在 欧 美 国 家 的 应 用 研 究 基 础 上 提 出 来 的 ꎬ 对 保 护 我 国 生 态 环 境 安 全 的 针 对 性 不 强 . 以 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 为 例 ꎬ 该 方 法 限 定 斑 马 鱼 受 精 卵 为 唯 一 试 验 材 料 ꎬ 并 未 提 及 其 他 试 验 鱼 种 . 考 虑 到 生 态 保 护 具 有 区 域 特 异 性 ꎬ 我 国 地 域 辽 阔 ꎬ 生 态 系 统 复 杂 ꎬ 采 用 符 合 我 国 环 境 保 护 特 点 的 本 土 模 式 生 物 进 行 生 态 毒 性 测 试 尤 为 关 键 和 必 要 . 稀 有 鮈 鲫 Ｇ ｏ ｂ ｉ ｏ ｃ ｙ ｐ ｒ ｉ ｓ ｒ ａｒ ｕｓ 作 为 我 国 本 土 的 一 种 小 型 鱼 类 [ １ ８ ] ꎬ 是 我 国 化 学 品 环 境 管 理 中 推 荐 的 试 验 鱼 种 之 一 [ １ ９ ￣ ２ ０ ] ꎻ 该 鱼 种 具 有 性 成 熟 快 、 在 人 工 控 制 条 件 下 可 终 年 产 卵 、 属 连 续 产 类 型 等 三 大 特 点 [ ２ １ ] ꎻ 由 于 其 胚 胎 具 有 光 学 透 明 性 ꎬ 可 透 过 卵 膜 清 晰 观 察 胚 胎 发 育 ꎬ 发 育 过 程 也 与 多 数 淡 水 硬 骨 鱼 类 似 [ ２ ２ ] ꎬ 具 有 成 为 中 国 特 有 模 式 鱼 种 的 潜 能 [ ２ ３ ] . 稀 有 鮈 鲫 属 鲤 科 淡 水 鱼 类 ꎬ 鲤 科 鱼 类 在 我 国 分 布 最 广 ꎬ 也 是 我 国 江 河 流 域 中 鱼 类 的 代 表 . 其 原 始 生 境 也 具 有 我 国 自 然 水 体 小 水 体 、 漫 滩 及 农 耕 系 统 [ ２ ４ ] 的 代 表 性 ꎬ 通 过 一 定 条 件 的 驯 化 ꎬ 可 以 在 我 国 大 部 分 地 域 适 应 . 因 此 ꎬ 作 为 水 生 生 态 系 统 中 的 脊 椎 动 物 ꎬ 稀 有 鮈 鲫 对 环 境 污 染 的 响 应 完 全 可 以 代 表 我 国 淡 水 鱼 类 的 状 况 . 截 至 ２ ０１ ５ 年 底 ꎬ 我 国 有 关 稀 有 鮈 鲫 的 研 究 论 文 已 有 ２５８ 篇 ꎬ 主 要 涉 及 稀 有 鮈 鲫 基 础 生 物 学 、 病 理 学 、 遗 传 学 、 毒 理 学 等 领 域 ꎬ 其 中 应 用 最 多 的 是 毒 理 学 领 域 [ ２ ５ ] . 因 此 ꎬ 以 稀 有 鮈 鲫 为 试 验 材 料 ꎬ 开 展 相 关 的 胚 胎 毒 理 学 研 究 有 一 定 的 基 础 依 据 [ ２ ６ ] . 该 研 究 优 化 筛 选 了 两 种 有 代 表 性 的 化 学 品 ３ꎬ ４ ￣ 二 氯 苯 胺 和 五 水 硫 酸 铜 ꎬ 参 考 Ｏ Ｅ Ｃ Ｄ 化 学 品 测 试 准 则 Ｎ ｏ . ２３６ 鱼 类 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 简 称 “ Ｏ Ｅ Ｃ Ｄ Ｔ Ｇ ２３６ ” ꎬ 进 行 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 ꎬ 通 过 对 ６ 次 试 验 结 果 重 复 性 进 行 评 价 ꎬ 验 证 在 鱼 类 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 中 稀 有 鮈 鲫 是 否 可 作 为 本 土 试 验 鱼 种 的 适 用 性 . １ 材 料 与 方 法 １ 􀆰 １ 试 验 材 料 １ 􀆰 １􀆰 １ 受 试 生 物 所 用 稀 有 鮈 鲫 亲 鱼 为 野 生 型 封 闭 群 Ｉ ｈ ｂ Ｉ Ｈ Ｂ ꎬ 由 中 国 科 学 院 水 生 生 物 研 究 所 提 供 . 为 保 证 良 好 的 受 精 率 ꎬ 选 择 肉 眼 观 察 健 康 的 、 未 经 任 何 药 物 处 理 且 已 繁 殖 至 少 ２ 次 以 上 的 稀 有 鮈 鲫 . 鱼 类 驯 养 培 养 室 提 供 １ ２ ｈ 光 ∶ １ ２ ｈ 暗 的 循 环 光 照 ꎬ 水 温 ２ ３ ２ ℃ . 试 验 以 集 中 产 卵 方 式 获 得 鱼 卵 ꎬ 即 将 ３ ０ 尾 性 成 熟 的 稀 有 鮈 鲫 雌 雄 数 量 比 为 １ ∶ ２ ꎬ 于 试 验 当 天 置 于 产 卵 缸 承 载 量 约 为 １ 尾 ∕ Ｌ 中 ꎬ 为 防 止 亲 鱼 捕 食 鱼 卵 ꎬ 在 产 卵 缸 中 放 入 网 架 〔 孔 径 大 小 约 为 ２ ０􀆰 ５ ｍ ｍ 〕 . 为 能 够 获 得 足 够 数 量 的 鱼 卵 ꎬ 平 行 准 备 ３ 组 . 待 灯 光 转 暗 后 １ ２ ｈ ꎬ 取 出 亲 鱼 ꎬ 收 集 受 精 卵 . 受 精 卵 的 观 察 采 用 体 视 显 微 镜 进 行 . 选 择 受 精 且 无 明 显 不 规 则 分 裂 如 不 对 称 、 囊 泡 形 成 或 破 损 的 鱼 卵 进 行 试 验 . 如 果 试 验 用 鱼 卵 数 为 ｎ ꎬ 则 取 总 数 为 ２ ｎ 的 鱼 卵 进 行 镜 检 ꎬ 挑 选 合 格 受 精 卵 数 量 为 ｘ 备 用 ꎬ 并 计 算 其 占 比 ｘ ∕ ２ ｎ １００ ％ . １ 􀆰 １􀆰 ２ 受 试 化 学 品 选 择 国 际 上 常 用 的 参 比 物 质 ３ ꎬ ４ ￣ 二 氯 苯 胺 ３ ꎬ ４ ￣ Ｄ Ｃ Ａ 和 五 水 硫 酸 铜 Ｃ ｕ Ｓ Ｏ ４ 􀅰 ５ Ｈ ２ Ｏ 开 展 试 验 . ３ ꎬ ４ ￣ 二 氯 苯 胺 〔 ３ ꎬ ４ ￣ ｄ ｉ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ａ ｎ ｉ ｌ ｉ ｎ ｅ ꎬ Ｃ ６ Ｈ ５ Ｃ ｌ ２ ꎬ 纯 度 ９ ８ ％ ꎬ 梯 希 爱 上 海 化 成 工 业 发 展 有 限 公 司 〕 ꎻ 五 水 硫 酸 铜 〔 ｃ ｏ ｐ ｐ ｅ ｒ Ⅱ ｓ ｕ ｌ ｆ ａ ｔ ｅ ｐ ｅ ｎ ｔ ａ ｈ ｙ ｄ ｒ ａ ｔ ｅ ꎬ Ｃ ｕＳＯ ４ 􀅰 ５ Ｈ ２ Ｏ ꎬ 纯 度 为 ９９ ％ ꎬ 上 海 麦 克 林 生 化 科 技 有 限 公 司 〕 ꎬ 以 上 化 学 品 均 为 分 析 纯 . ３ ６ １ １ 环 境 科 学 研 究 第 ３ ２ 卷 母 液 制 备 将 已 知 量 的 ３ ꎬ ４ ￣ 二 氯 苯 胺 添 加 到 一 定 体 积 的 试 验 用 水 中 ꎬ 连 续 磁 力 搅 拌 ２ ４ ｈ 至 溶 解 ꎬ 配 制 质 量 浓 度 为 ２ ０ ｍ ｇ ∕ Ｌ 的 母 液 ꎻ 将 已 知 量 的 五 水 硫 酸 铜 溶 于 一 定 体 积 的 去 离 子 水 中 ꎬ 配 制 质 量 浓 度 为 １ ０ ｍ ｇ ∕ Ｌ 的 母 液 . 试 验 期 间 ꎬ 母 液 每 天 制 备 . 试 验 溶 液 配 制 将 适 量 的 样 品 母 液 添 加 到 试 验 用 水 中 ꎬ 稀 释 成 各 浓 度 的 试 验 溶 液 . １􀆰 １􀆰 ３ 试 验 用 水 试 验 用 水 为 经 活 性 炭 过 滤 、 紫 外 灭 菌 的 自 来 水 ꎬ并 在 恒 温 储 水 箱 中 连 续 曝 气 至 氧 饱 和 ꎬ 恒 温 ２ ６ １ ℃ . 水 硬 度 为 １００ ３ ０ ０ ｍ ｇ ∕ Ｌ 以 Ｃ ａ Ｃ Ｏ ３ 计 ꎬ ｐＨ 为 ６􀆰 ５ ８􀆰 ５ ꎬ 且 试 验 期 间 变 化 不 超 过 １􀆰 ５ 个 单 位 . １􀆰 １􀆰 ４ 仪 器 设 备 和 容 器 体 视 显 微 镜 Ｌ ｕｍ ａ ｒ Ｖ １２ ꎬ Ｃ ａ ｒ ｌ Ｚ ｅ ｉ ｓ ｓ ꎬ 德 国 ꎻ 药 品 稳 定 性 试 验 箱 Ｍ Ｔ ￣ ７ ５ ０ Ｂ ꎬ 施 都 凯 仪 器 设 备 有 限 公 司 ꎻ 多 参 数 水 质 分 析 仪 Ｗ Ｔ Ｗ ３４ ３ ０ ꎬ Ｔ ｈｅ ｒ ｍ ｏ Ｆ ｉ ｓ ｈｅ ｒ ꎬ 美 国 ꎻ 电 子 分 析 天 平 Ａ Ｌ ２０ ４ ꎬ Ｍ ｅ ｔ ｔ ｌ ｅ ｒ Ｔ ｏ ｌ ｅ ｄｏ ꎬ 瑞 士 ꎻ ２４ 标 准 带 盖 孔 板 . １􀆰 ２ 试 验 方 法 参 考 Ｏ Ｅ Ｃ Ｄ Ｔ Ｇ ２ ３６ ꎬ 分 别 各 进 行 ６ 次 ３ ꎬ ４ ￣ 二 氯 苯 胺 和 五 水 硫 酸 铜 对 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 的 急 性 毒 性 试 验 ꎬ 通 过 固 定 试 验 条 件 和 试 验 方 式 ꎬ 在 不 同 时 间 、 不 同 操 作 人 员 、 不 同 分 组 亲 鱼 条 件 下 比 较 分 析 试 验 结 果 的 重 复 性 . １􀆰 ２􀆰 １ 试 验 原 理 将 新 受 精 的 鱼 类 胚 胎 暴 露 于 不 同 浓 度 的 样 品 水 溶 液 中 ９ ６ ｈ ꎬ 其 后 每 ２ ４ ｈ 观 察 并 记 录 以 下 １ ４ 个 死 亡 表 征 卵 凝 结 、 体 节 缺 失 、 尾 部 未 分 离 、 无 心 跳 . 当 暴 露 结 束 时 ꎬ 通 过 上 述 ４ 个 表 征 的 阳 性 结 果 确 定 急 性 毒 性 ꎬ 并 计 算 ９６ ｈ Ｌ Ｃ ５ ０ ９ ６ ｈ 半 致 死 浓 度 . １􀆰 ２􀆰 ２ 试 验 条 件 试 验 前 在 已 预 处 理 ２４ ｈ 的 ２ ４ 孔 板 中 ꎬ 每 孔 注 入 ２ ｍ Ｌ 新 鲜 制 备 的 试 验 溶 液 ꎬ 并 最 晚 在 １ ６ 细 胞 期 前 开 始 试 验 . 试 验 期 间 ꎬ 温 度 为 ２６ １ ℃ ꎬ 光 照 周 期 为 １２ ｈ ∶ １２ ｈ ꎬ 采 用 每 ２４ ｈ 更 换 试 验 溶 液 的 方 式 进 行 试 验 ꎬ 试 验 持 续 ９６ ｈ . １􀆰 ２􀆰 ３ 试 验 操 作 暴 露 浓 度 ３ ꎬ ４ ￣ 二 氯 苯 胺 配 制 浓 度 分 别 为 ５ 、 ７ 、 １０ 、 １ ４ 、 ２０ ｍ ｇ ∕ Ｌ 试 验 组 编 号 依 次 记 为 Ａ １ 、 Ａ ２ 、 Ａ ３ 、 Ａ ４ 、 Ａ ５ ꎬ 五 水 硫 酸 铜 配 制 浓 度 分 别 ０􀆰 ７ 、 １ 􀆰 ０ 、 １ 􀆰 ５ 、 ２􀆰 ３ 、 ３ 􀆰 ５ ｍ ｇ ∕ Ｌ 试 验 组 编 号 依 次 记 为 Ｂ １ 、 Ｂ ２ 、 Ｂ ３ 、 Ｂ ４ 、 Ｂ ５ ꎬ 均 以 几 何 级 数 分 布 ꎬ 浓 度 组 间 隔 系 数 公 比 不 超 过 ２􀆰 ２ ꎻ 同 时 ꎬ 每 组 设 １ 个 空 白 对 照 组 试 验 用 水 ꎬ 不 设 平 行 . 胚 胎 分 配 所 有 试 验 均 在 标 准 ２４ 孔 板 中 完 成 ꎬ 每 孔 １ 个 受 精 卵 . 各 组 均 使 用 １ 块 ２４ 孔 板 ꎬ 其 中 ２０ 个 孔 注 入 试 验 溶 液 ꎬ 另 外 ４ 个 孔 注 入 试 验 用 水 作 为 板 内 指 控 . 空 白 对 照 组 ２４ 个 孔 均 注 入 试 验 用 水 . 表 征 观 察 与 判 定 每 ２４ ｈ 观 察 记 录 １ 次 胚 胎 死 亡 数 和 其 他 可 观 察 效 应 ꎻ 从 ４８ ｈ 开 始 ꎬ 每 ２４ ｈ 记 录 １ 次 空 白 对 照 组 和 样 品 组 的 胚 胎 孵 化 数 . 试 验 结 束 时 ꎬ 如 板 内 质 控 死 亡 数 超 过 １ 个 ꎬ 则 整 板 无 效 ꎬ 该 浓 度 组 剔 除 . 水 质 参 数 测 定 在 试 验 开 始 和 结 束 时 测 定 空 白 对 照 组 和 最 高 浓 度 样 品 组 的 硬 度 和 电 导 率 ꎬ 试 验 期 间 每 次 更 新 前 后 均 测 定 空 白 对 照 组 和 最 高 浓 度 样 品 组 的 ｐＨ . 在 试 验 结 束 时 ꎬ 测 定 空 白 对 照 组 和 最 高 浓 度 样 品 组 存 活 胚 胎 的 溶 解 氧 浓 度 . 试 验 期 间 ꎬ 每 天 随 机 选 取 ３ 个 试 验 容 器 测 定 １ 次 温 度 . １ 􀆰 ２􀆰 ４ 死 亡 数 计 算 每 个 受 试 胚 胎 每 ２ ４ ｈ 观 察 以 下 几 个 终 点 卵 凝 结 、 体 节 未 形 成 、 尾 部 未 与 卵 黄 囊 分 离 、 失 去 心 跳 见 表 １ ꎬ 观 察 到 上 述 表 征 之 一 即 可 判 定 死 亡 . 此 外 ꎬ 从 ４ ８ ｈ 开 始 ꎬ 每 日 观 察 １ 次 样 品 组 和 空 白 对 照 组 的 孵 化 数 . 分 别 计 算 ２４ 、 ４８ 、 ７２ 和 ９６ ｈ 各 试 验 组 各 板 胚 胎 的 累 计 死 亡 数 . 表 １ 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 死 亡 表 征 及 观 察 现 象 [ ７ ] Ｔ ａ ｂ ｌ ｅ １ Ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｄ ｉ ｃ ａ ｔ ｏ ｒ ｓ ｏ ｆ ｌ ｅ ｔ ｈ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ａ ｎ ｄ ｆ ｏ ｕ ｒ ａ ｐ ｉ ｃ ａ ｌ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｉ ｎ ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｍ ｂ ｒ ｙ ｏ ａ ｃ ｕ ｔ ｅ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ｔ ｅ ｓ ｔ [ ７ ] 死 亡 表 征 观 察 现 象 卵 凝 结 卵 黄 凝 结 的 胚 胎 肉 眼 观 察 呈 乳 白 色 ꎬ 在 显 微 镜 下 呈 黑 色 . 可 分 别 在 ２ ４ 、 ４ ８ 、 ７ ２ 和 ９ ６ ｈ 观 察 体 节 未 形 成 在 ２ ６ １ ℃ 下 ꎬ 正 常 发 育 的 胚 胎 在 ２ ４ ｈ 后 会 形 成 大 约 ２ ０ 节 体 节 . 体 节 发 育 正 常 的 胚 胎 会 有 自 主 运 动 来 回 收 缩 ꎬ 自 主 运 动 的 出 现 可 表 明 胚 胎 体 节 发 育 成 型 . 体 节 缺 失 可 分 别 在 ２ ４ 、 ４ ８ 、 ７ ２ 和 ９ ６ ｈ 观 察 . 如 果 暴 露 ２ ４ ｈ 后 体 节 未 形 成 ꎬ 可 归 因 于 发 育 迟 缓 ꎻ 如 果 ４ ８ ｈ 后 仍 未 形 成 ꎬ 可 判 定 死 亡 尾 部 未 分 离 正 常 发 育 的 胚 胎 ꎬ 在 其 身 体 后 部 伸 长 后 可 观 察 到 尾 部 与 卵 黄 囊 分 离 的 现 象 . 尾 部 未 分 离 可 分 别 在 ２ ４ 、 ４ ８ 、 ７ ２ 和 ９ ６ ｈ 观 察 失 去 心 跳 在 ２ ６ １ ℃ 下 ꎬ 正 常 发 育 的 胚 胎 在 ４ ８ ｈ 后 会 有 心 跳 . 心 率 不 齐 或 有 心 跳 但 腹 部 无 血 流 循 环 均 不 能 判 定 胚 胎 死 亡 . 判 定 胚 胎 无 心 跳 ꎬ 至 少 在 放 大 ８ ０ 倍 下 观 察 持 续 １ ｍ ｉ ｎ 或 以 上 . 无 心 跳 可 分 别 在 ４ ８ 、 ７ ２ 和 ９ ６ ｈ 观 察 １ 􀆰 ２􀆰 ５ 试 验 有 效 性 所 有 试 验 均 满 足 下 列 有 效 性 试 验 用 胚 胎 总 受 精 率 ≥ ７ ０ ％ ꎻ 试 验 期 间 ꎬ 试 验 容 器 中 温 度 维 持 在 ２ ６ １ ℃ ꎻ 试 验 结 束 时 ꎬ 空 白 对 照 组 胚 胎 存 活 率 ≥ ９０ ％ ꎬ 胚 胎 孵 ４ ６ １ １第 ７ 期 张 京 佶 等 稀 有 鮈 鲫 在 鱼 类 胚 胎 急 性 毒 性 试 验 中 的 适 用 性 研 究 化 率 ≥ ８０ ％ ꎬ 空 白 对 照 组 和 最 高 浓 度 处 理 组 溶 液 的 溶 解 氧 含 量 ≥ ８０ ％ 空 气 饱 和 值 . １􀆰 ３ 数 据 处 理 通 过 输 入 空 白 对 照 组 和 各 浓 度 试 验 组 胚 胎 ９６ ｈ 的 累 计 死 亡 数 ꎬ 绘 制 浓 度 ￣ 死 亡 率 曲 线 图 . 采 用 点 估 计 法 计 算 ９ ６ ｈ Ｌ Ｃ ５ ０ 及 ９ ５ ％ 置 信 限 ꎬ 该 分 析 用 毒 理 学 统 计 软 件 Ｔ ｏ ｘ Ｃ ａ ｌ ｃ ｖ ５􀆰 ０􀆰 ３２ 完 成 . ２ 结 果 与 讨 论 ２􀆰 １ 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 作 为 受 试 生 物 的 适 宜 性 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 呈 圆 形 ꎬ 有 黏 性 ꎬ 遇 水 沉 于 容 器 底 部 ꎬ 其 卵 壳 膜 无 色 透 明 ꎬ 在 显 微 镜 下 可 观 察 胚 胎 内 发 育 状 况 . 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 发 育 过 程 与 斑 马 鱼 相 类 似 ꎬ 包 含 卵 裂 期 、 囊 胚 期 、 原 肠 期 、 分 裂 期 、 成 形 期 和 孵 化 期 [ ２ ２ ] . 当 水 温 为 ２５ ０ 􀆰 ５ ℃ 时 ꎬ 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 孵 化 时 间 约 为 ７５ ｈ ꎻ 当 水 温 为 ２２ 􀆰 ０ ２ ８􀆰 ０ ℃ 时 ꎬ 孵 化 时 间 为 ８９ ｈ [ ２ ７ ] ꎻ ２５ ℃ 下 斑 马 鱼 胚 胎 的 孵 化 时 间 为 ８８ ｈ [ ２ ８ ] . 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 的 形 态 特 征 符 合 胚 胎 试 验 观 察 的 需 求 ꎬ 可 观 察 到 各 死 亡 表 征 . 在 试 验 要 求 的 温 度 〔 ２ ６ １ ℃ 〕 下 ꎬ 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 的 孵 化 时 间 小 于 ９６ ｈ ꎬ 可 满 足 空 白 对 照 组 孵 化 率 的 有 效 性 要 求 . 尽 管 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 开 展 毒 性 试 验 具 有 生 物 适 宜 性 ꎬ 但 仍 有 一 些 差 异 ① 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 直 径 相 对 较 大 ꎬ 卵 径 均 超 过 １ ｍ ｍ ꎬ 且 可 黏 沉 于 容 器 底 部 ꎬ 不 易 随 水 流 波 动 . 卵 径 大 加 之 黏 性 大 ꎬ 在 试 验 中 便 于 观 察 与 操 作 . ② 稀 有 鮈 鲫 胚 胎 温 度 适 应 性 广 . 水 温 为 １ ３􀆰 ０ ３１ 􀆰 ６