书书书ＩＣＳ１３０６０３０Ｚ６０中华人民共和国国家标准ＧＢ１８４６６２００５代替ＧＢ１８４６６２００１部分代替ＧＢ８９７８１９９６医疗机构水污染物排放标准Ｄｉｓｃｈａｒｇｅｓｔａｎｄａｒｄｏｆｗａｔｅｒｐｏｌｌｕｔａｎｔｓｆｏｒｍｅｄｉｃａｌｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ２００５０７２７发布２００６０１０１实施国家环境保护总局国家质量监督检验检疫总局发布ＧＢ１８４６６２００５中华人民共和国国 家 标 准医疗机构水污染物排放标准ＧＢ１８４６６２００５中国环境科学出版社出版发行（１０００６２ 北京崇文区广渠门内大街１６号）网址ｈｔｔｐ／／ｗｗｗｃｅｓｐｃｎ电子信箱ｂｉａｎｊｉ４＠ｃｅｓｐｃｎ电话０１０６７１１２７３８ 传真０１０６７１１２７３８印刷厂印刷版权专有 违者必究２００５年９月第 １ 版 开本 ８８０１２３０ １／１６２００５年９月第１次印刷印张 ２２５印数 １４０００字数 ７５千字统一书号１３８０２０９０２８定价２４００元书书书ⅰ国家环境保护总局公 告２００５年 第３５号为贯彻中华人民共和国环境保护法，加强对医疗机构污水、污水处理站废气、污泥排放的控制和管理，预防和控制传染病的发生和流行，保障人体健康，加强环境管理，现批准医疗机构水污染物排放标准为国家污染物排放标准，并由我局和国家质量监督检验检疫总局联合发布。标准编号、名称如下ＧＢ１８４６６２００５ 医疗机构水污染物排放标准本标准自实施之日起，代替污水综合排放标准（ＧＢ８９７８１９９６）中有关医疗机构水污染物排放标准部分，并取代医疗机构污水排放要求（ＧＢ１８４６６２００１）。上述标准为强制性标准，由中国环境科学出版社出版，自２００６年１月１日起实施。标准信息可在国家环境保护总局网站（ｗｗｗ．ｓｅｐａ．ｇｏｖ．ｃｎ）和中国环境标准网站（ｗｗｗ．ｅｓ．ｏｒｇ．ｃｎ）上查询。特此公告。２００５年７月２７日书书书ＧＢ１８４６６２００５ⅲ目 次前言ⅳG21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21１ 范围１G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21２ 规范性引用文件１G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21３ 术语和定义１G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21４ 技术内容１G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21４１ 污水排放要求１G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21４２ 废气排放要求４G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21４３ 污泥控制与处置４G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21５ 处理工艺与消毒要求４G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21６ 取样与监测５G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21６１ 污水取样与监测５G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21６２ 大气取样与监测６G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21６３ 污泥取样与监测６G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21７ 标准的实施与监督７G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21附录Ａ（规范性附录） 医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群的检验方法８G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21附录Ｂ（规范性附录） 医疗机构污水和污泥中沙门氏菌的检验方法１５G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21附录Ｃ（规范性附录） 医疗机构污水及污泥中志贺氏菌的检验方法１９G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21附录Ｄ（标准的附录） 医疗机构污泥中蛔虫卵的检验方法２２G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21附录Ｅ（规范性附录） 医疗机构污水和污泥中结核杆菌的检验方法２４G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21 G21附录Ｆ（规范性附录） 医疗机构污水污染物（ＣＯＤ、ＢＯＤ、ＳＳ）单位排放负荷计算方法２７G21 G21 G21ＧＢ１８４６６２００５ⅳ前 言为贯彻中华人民共和国环境保护法、中华人民共和国水污染防治法、中华人民共和国海洋环境保护法、中华人民共和国大气污染防治法、中华人民共和国传染病防治法，加强对医疗机构污水、污水处理站废气、污泥排放的控制和管理，预防和控制传染病的发生和流行，保障人体健康，维护良好的生态环境，制定本标准。本标准规定了医疗机构污水及污水处理站产生的废气和污泥的污染物控制项目及其排放限值、处理工艺与消毒要求、取样与监测和标准的实施与监督等。本标准自实施之日起，代替ＧＢ８９７８１９９６污水综合排放标准中有关医疗机构水污染物排放标准部分，并取代ＧＢ１８４６６２００１医疗机构污水排放要求。新、扩、改医疗机构自本标准实施之日起按本标准实施管理，现有医疗机构在２００７年１２月３１日前达到本标准要求。本标准的附录Ａ、附录Ｂ、附录Ｃ、附录Ｄ、附录Ｅ和附录Ｆ为规范性附录。本标准为首次发布。本标准由国家环境保护总局科技标准司提出并归口。本标准委托北京市环境保护科学研究院和中国疾病预防控制中心起草。本标准由国家环境保护总局２００５年７月２７日批准。本标准２００６年１月１日起实施。本标准由国家环境保护总局负责解释。书书书ＧＢ１８４６６２００５医疗机构水污染物排放标准１ 范围本标准规定了医疗机构污水、污水处理站产生的废气、污泥的污染物控制项目及其排放和控制限值、处理工艺和消毒要求、取样与监测和标准的实施与监督。本标准适用于医疗机构污水、污水处理站产生污泥及废气排放的控制，医疗机构建设项目的环境影响评价、环境保护设施设计、竣工验收及验收后的排放管理。当医疗机构的办公区、非医疗生活区等污水与病区污水合流收集时，其综合污水排放均执行本标准。建有分流污水收集系统的医疗机构，其非病区生活区污水排放执行ＧＢ８９７８的相关规定。２ 规范性引用文件下列标准和本标准表５、表６所列分析方法标准及规范所含条文在本标准中被引用即构成为本标准的条文，与本标准同效。当上述标准和规范被修订时，应使用其最新版本。ＧＢ８９７８ 污水综合排放标准ＧＢ３８３８ 地表水环境质量标准ＧＢ３０９７ 海水水质标准ＧＢ１６２９７ 大气污染物综合排放标准ＨＪ／Ｔ５５ 大气污染物无组织排放监测技术导则ＨＪ／Ｔ９１ 地表水和污水检测技术规范３ 术语和定义本标准采用下列定义。３１ 医疗机构 ｍｅｄｉｃａｌｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ指从事疾病诊断、治疗活动的医院、卫生院、疗养院、门诊部、诊所、卫生急救站等。３２ 医疗机构污水 ｍｅｄｉｃａｌｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｗａｓｔｅｗａｔｅｒ指医疗机构门诊、病房、手术室、各类检验室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平间等处排出的诊疗、生活及粪便污水。当医疗机构其他污水与上述污水混合排出时一律视为医疗机构污水。３３ 污泥 ｓｌｕｄｇｅ指医疗机构污水处理过程中产生的栅渣、沉淀污泥和化粪池污泥。３４ 废气 ｗａｓｔｅｇａｓ指医疗机构污水处理过程中产生的有害气体。４ 技术内容４１ 污水排放要求４１１ 传染病和结核病医疗机构污水排放一律执行表１的规定。４１２ 县级及县级以上或２０张床位及以上的综合医疗机构和其他医疗机构污水排放执行表２的规定。直接或间接排入地表水体和海域的污水执行排放标准，排入终端已建有正常运行城镇二级污水处理厂的下水道的污水，执行预处理标准。１ＧＢ１８４６６２００５表１ 传染病、结核病医疗机构水污染物排放限值（日均值）序号控 制 项 目标 准 值１粪大肠菌群数／（ＭＰＮ／Ｌ）１００２肠道致病菌不得检出３肠道病毒不得检出４结核杆菌不得检出５ｐＨ６～９６化学需氧量（ＣＯＤ）浓度／（ｍｇ／Ｌ）最高允许排放负荷／［ｇ／（床位ｄ）］６０６０７生化需氧量（ＢＯＤ）浓度／（ｍｇ／Ｌ）最高允许排放负荷／［ｇ／（床位ｄ）］２０２０８悬浮物（ＳＳ）浓度／（ｍｇ／Ｌ）最高允许排放负荷［ｇ／（床位ｄ）］２０２０９氨氮／（ｍｇ／Ｌ）１５１０动植物油／（ｍｇ／Ｌ）５１１石油类／（ｍｇ／Ｌ）５１２阴离子表面活性剂／（ｍｇ／Ｌ）５１３色度／（稀释倍数）３０１４挥发酚／（ｍｇ／Ｌ）０５１５总氰化物／（ｍｇ／Ｌ）０５１６总汞／（ｍｇ／Ｌ）００５１７总镉／（ｍｇ／Ｌ）０１１８总铬／（ｍｇ／Ｌ）１５１９六价铬／（ｍｇ／Ｌ）０５２０总砷／（ｍｇ／Ｌ）０５２１总铅／（ｍｇ／Ｌ）１０２２总银／（ｍｇ／Ｌ）０５２３总α／（Ｂｑ／Ｌ）１２４总β／（Ｂｑ／Ｌ）１０２５总余氯１），２）／（ｍｇ／Ｌ）（直接排入水体的要求）０５注１）采用含氯消毒剂消毒的工艺控制要求为消毒接触池的接触时间≥１５ｈ，接触池出口总余氯６５～１０ｍｇ／Ｌ。２）采用其他消毒剂对总余氯不做要求。２ＧＢ１８４６６２００５表２ 综合医疗机构和其他医疗机构水污染物排放限值（日均值）序号控 制 项 目排放标准预处理标准１粪大肠菌群数／（ＭＰＮ／Ｌ）５００５０００２肠道致病菌不得检出３肠道病毒不得检出４ｐＨ６～９６～９５化学需氧量（ＣＯＤ）浓度／（ｍｇ／Ｌ）最高允许排放负荷／［ｇ／（床位ｄ）］６０６０２５０２５０６生化需氧量（ＢＯＤ）浓度／（ｍｇ／Ｌ）最高允许排放负荷／［ｇ／（床位ｄ）］２０２０１００１００７悬浮物（ＳＳ）浓度／（ｍｇ／Ｌ）最高允许排放负荷／［ｇ／（床位ｄ）］２０２０６０６０８氨氮／（ｍｇ／Ｌ）１５９动植物油／（ｍｇ／Ｌ）５２０１０石油类／（ｍｇ／Ｌ）５２０１１阴离子表面活性剂／（ｍｇ／Ｌ）５１０１２色度／（稀释倍数）３０１３挥发酚／（ｍｇ／Ｌ）０５１０１４总氰化物／（ｍｇ／Ｌ）０５０５１５总汞／（ｍｇ／Ｌ）００５００５１６总镉／（ｍｇ／Ｌ）０１０１１７总铬／（ｍｇ／Ｌ）１５１５１８六价铬／（ｍｇ／Ｌ）０５０５１９总砷／（ｍｇ／Ｌ）０５０５２０总铅／（ｍｇ／Ｌ）１０１０２１总银／（ｍｇ／Ｌ）０５０５２２总α／（Ｂｑ／Ｌ）１１２３总β／（Ｂｑ／Ｌ）１０１０２４总余氯１），２）／（ｍｇ／Ｌ）０５注１）采用含氯消毒剂消毒的工艺控制要求为排放标准消毒接触池接触时间≥１ｈ，接触池出口总余氯３～１０ｍｇ／Ｌ。预处理标准消毒接触池接触时间≥１ｈ，接触池出口总余氯２～８ｍｇ／Ｌ。２）采用其他消毒剂对总余氯不做要求。４１３ 县级以下或２０张床位以下的综合医疗机构和其他所有医疗机构污水经消毒处理后方可排放。４１４ 禁止向ＧＢ３８３８Ⅰ、Ⅱ类水域和Ⅲ类水域的饮用水保护区和游泳区，ＧＢ３０９７一、二类海域直接排放医疗机构污水。３ＧＢ１８４６６２００５４１５ 带传染病房的综合医疗机构，应将传染病房污水与非传染病房污水分开。传染病房的污水、粪便经过消毒后方可与其他污水合并处理。４１６ 采用含氯消毒剂进行消毒的医疗机构污水，若直接排入地表水体和海域，应进行脱氯处理，使总余氯小于０５ｍｇ／Ｌ。４２ 废气排放要求４２１ 污水处理站排出的废气应进行除臭除味处理，保证污水处理站周边空气中污染物达到表３要求。表３ 污水处理站周边大气污染物最高允许浓度序号控 制 项 目标 准 值１氨／（ｍｇ／ｍ３）１０２硫化氢／（ｍｇ／ｍ３）００３３臭气浓度（无量纲）１０４氯气／（ｍｇ／ｍ３）０１５甲烷（指处理站内最高体积百分数／％）１４２２ 传染病和结核病医疗机构应对污水处理站排出的废气进行消毒处理。４３ 污泥控制与处置４３１ 栅渣、化粪池和污水处理站污泥属危险废物，应按危险废物进行处理和处置。４３２ 污泥清掏前应进行监测，达到表４要求。表４ 医疗机构污泥控制标准医疗机构类别粪大肠菌群数／（ＭＰＮ／ｇ）肠道致病菌肠道病毒结核杆菌蛔虫卵死亡率／％传染病医疗机构≤１００不得检出不得检出＞９５结核病医疗机构≤１００不得检出＞９５综合医疗机构和其他医疗机构≤１００＞９５５ 处理工艺与消毒要求５１ 医疗机构病区和非病区的污水，传染病区和非传染病区的污水应分流，不得将固体传染性废物、各种化学废液弃置和倾倒排入下水道。５２ 传染病医疗机构和综合医疗机构的传染病房应设专用化粪池，收集经消毒处理后的粪便排泄物等传染性废物。５３ 化粪池应按最高日排水量设计，停留时间为２４～３６ｈ。清掏周期为１８０～３６０ｄ。５４ 医疗机构的各种特殊排水应单独收集并进行处理后，再排入医院污水处理站。５４１ 低放射性废水应经衰变池处理。５４２ 洗相室废液应回收银，并对废液进行处理。５４３ 口腔科含汞废水应进行除汞处理。５４４ 检验室废水应根据使用化学品的性质单独收集，单独处理。５４５ 含油废水应设置隔油池处理。５５ 传染病医疗机构和结核病医疗机构污水处理宜采用二级处理＋消毒工艺或深度处理＋消毒工艺。５６ 综合医疗机构污水排放执行排放标准时，宜采用二级处理＋消毒工艺或深度处理＋消毒工艺；４ＧＢ１８４６６２００５执行预处理标准时宜采用一级处理或一级强化处理＋消毒工艺。５７ 消毒剂应根据技术经济分析选用，通常使用的有二氧化氯、次氯酸钠、液氯、紫外线和臭氧等。采用含氯消毒剂时按表１、表２要求设计。５７１ 采用紫外线消毒，污水悬浮物浓度应小于１０ｍｇ／Ｌ，照射剂量３０～４０ｍＪ／ｃｍ２，照射接触时间应大于１０ｓ或由试验确定。５７２ 采用臭氧消毒，污水悬浮物浓度应小于２０ｍｇ／Ｌ，臭氧用量应大于１０ｍｇ／Ｌ，接触时间应大于１２ｍｉｎ或由试验确定。６ 取样与监测６１ 污水取样与监测６１１ 应按规定设置科室处理设施排出口和单位污水外排口，并设置排放口标志。６１２ 表１第１６～２２项，表２第１５～２１项在科室处理设施排出口取样，总α、总β在衰变池出口取样监测。其他污染物的采样点一律设在排污单位的外排口。６１２ 医疗机构污水外排口处应设污水计量装置，并宜设污水比例采样器和在线监测设备。６１３ 监测频率６１３１ 粪大肠菌群数每月监测不得少于１次。采用含氯消毒剂消毒时，接触池出口总余氯每日监测不得少于２次（采用间歇式消毒处理的，每次排放前监测）。６１３２ 肠道致病菌主要监测沙门氏菌、志贺氏菌。沙门氏菌的监测，每季度不少于１次；志贺氏菌的监测，每年不少于２次。其他致病菌和肠道病毒按６１３３规定进行监测。结核病医疗机构根据需要监测结核杆菌。６１３３ 收治了传染病病人的医院应加强对肠道致病菌和肠道病毒的监测。同时收治的感染上同一种肠道致病菌或肠道病毒的甲类传染病病人数超过５人、或乙类传染病病人数超过１０人、或丙类传染病病人数超过２０人时，应及时监测该种传染病病原体。６１３４ 理化指标监测频率ｐＨ每日监测不少于２次，ＣＯＤ和ＳＳ每周监测１次，其他污染物每季度监测不少于１次。６１３５ 采样频率每４小时采样１次，一日至少采样３次，测定结果以日均值计。６１４ 监督性监测按ＨＪ／Ｔ９１执行。６１５ 监测分析方法按表５和附录执行。６１６ 污染物单位排放负荷计算见附录Ｆ。表５ 水污染物监测分析方法序号控制项目测 定 方 法测定下限／（ｍｇ／Ｌ）方法来源１粪大肠菌群数多管发酵法附录Ａ２沙门氏菌附录Ｂ３志贺氏菌附录Ｃ４结核杆菌附录Ｅ５总余氯Ｎ，Ｎ－二乙基－１，４－苯二胺分光光度法Ｎ，Ｎ－二乙基－１，４－苯二胺滴定法ＧＢ１１８９８ＧＢ１１８９７６化学需氧量（ＣＯＤ）重铬酸盐法３０ＧＢ１１９１４７生化需氧量（ＢＯＤ）稀释与接种法２ＧＢ７４８８８悬浮物（ＳＳ）重量法ＧＢ１１９０１９氨氮蒸馏和滴定法比色法０２００５ＧＢ７４７８ＧＢ７４７９５ＧＢ１８４６６２００５续表序号控制项目测 定 方 法测定下限／（ｍｇ／Ｌ）方法来源１０动植物油红外光度法０１ＧＢ／Ｔ１６４８８１１石油类红外光度法０１ＧＢ／Ｔ１６４８８１２阴离子表面活性剂亚甲蓝分光光度法００５ＧＢ７４９４１３色度稀释倍数法ＧＢ１１９０３１４ｐＨ值玻璃电极法ＧＢ６９２０１５总汞冷吸收分光光度法双硫腙分光光度法００００１０００２ＧＢ７４６８ＧＢ７４６９１６挥发酚蒸馏后４－氨基安替比林分光光度法０００２ＧＢ７４９０硝酸银滴定法０２５ＧＢ７４８６１７总氰化物异烟酸－吡唑啉酮比色法０００４ＧＢ７４８６吡啶－巴比妥酸比色法０００２ＧＢ７４８６１８总镉原子吸收分光光度法（螯合萃取法）双硫腙分光光度法０００１０００１ＧＢ７４７５ＧＢ７４７１１９总铬高锰酸钾氧化－二苯碳酰二肼分光光度法０００４ＧＢ７４６６２０六价铬二苯碳酰二肼分光光度法０００４ＧＢ７４６７２１总砷二乙基二硫代氨基甲酸银分光光度法０００７ＧＢ７４８５２２总铅原子吸收分光光度法（螯合萃取法）双硫腙分光光度法００１００１ＧＢ７４７５ＧＢ７４７０２３总银原子吸收分光光度法镉试剂２Ｂ分光光度法００３００１ＧＢ／Ｔ１５５５５２ＧＢ１１９０８２４总α厚源法００５Ｂｑ／ＬＥＪ／Ｔ１０７５２５总β蒸发法ＥＪ／Ｔ９００６２ 大气取样与监测６２１ 污水处理站大气监测点的布置方法与采样方法按ＧＢ１６２９７中附录Ｃ和ＨＪ／Ｔ５５的有关规定执行。６２２ 采样频率，每２小时采样一次，共采集４次，取其最大测定值。每季度监测一次。６２３ 监测分析方法按表６执行。表６ 大气污染物监测分析方法序号控 制 项 目测 定 方 法方法来源１氨次氯酸钠－水杨酸分光光度法ＧＢ／Ｔ１４６７９２硫化氢气相色谱法ＧＢ／Ｔ１４６７８３臭气浓度（无量纲）三点比较式臭袋法ＧＢ／Ｔ１４６７５４氯气甲基橙分光光度法ＨＪ／Ｔ３０５甲烷气相色谱法ＣＪ／Ｔ３０３７６３ 污泥取样与监测６３１ 取样方法，采用多点取样，样品应有代表性，样品重量不小于１ｋｇ。清掏前监测。６ＧＢ１８４６６２００５６３２ 监测分析方法见附录Ａ、附录Ｂ、附录Ｃ、附录Ｄ和附录Ｅ。７ 标准的实施与监督７１ 本标准由县级以上人民政府环境保护行政主管部门负责监督实施。７２ 省、自治区、直辖市人民政府对执行本标准不能达到本地区环境功能要求时，可以根据总量控制要求和环境影响评价结果制定严于本标准的地方污染物排放标准。７ＧＢ１８４６６２００５附 录 Ａ（规范性附录）医疗机构污水和污泥中粪大肠菌群的检验方法Ａ１ 仪器和设备Ａ１１ 高压蒸汽灭菌器。Ａ１２ 干燥灭菌箱。Ａ１３ 培养箱３７℃。Ａ１４ 恒温水浴箱。Ａ１５ 电炉。Ａ１６ 天平。Ａ１７ 灭菌平皿。Ａ１８ 灭菌刻度吸管。Ａ１９ 酒精灯Ａ２ 培养基和试剂Ａ２１ 乳糖胆盐培养液Ａ２１１ 成分蛋白胨 ２０ｇ猪胆盐（或牛、羊胆盐）５ｇ乳糖５ｇ０４％溴甲酚紫水溶液２５ｍｌ蒸馏水１０００ｍｌＡ２１２ 制法将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于１０００ｍｌ蒸馏水中，调整ｐＨ到７４，加入指示剂，充分混匀，分装于内有倒管的试管中。１１５℃灭菌２０ｍｉｎ。贮存于冷暗处备用。Ａ２２ 三倍浓度乳糖胆盐培养液Ａ２２１ 成分蛋白胨６０ｇ猪胆盐（或牛、羊胆盐）１５ｇ乳糖１５ｇ０４％溴甲酚紫水溶液７５ｍｌ蒸馏水１０００ｍｌＡ２２２ 制法制法同附录Ａ２１２。Ａ２３ 伊红亚甲基蓝培养基（ＥＭＢ培养基）Ａ２３１ 成分蛋白胨１０ｇ乳糖１０ｇ磷酸氢二钾２ｇ琼脂２０ｇ８ＧＢ１８４６６２００５２％伊红水溶液２０ｍｌ０５％美蓝水溶液１３ｍｌ蒸馏水１０００ｍｌＡ２３２ 制法将琼脂加到９００ｍｌ蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾和蛋白胨，混匀使溶解，再加入蒸馏水补足至１０００ｍｌ，调整ｐＨ至７２～７４。趁热用脱脂棉和砂布过滤，再加入乳糖，混匀，定量分装于烧瓶内，１１５℃灭菌２０ｍｉｎ，作为储备培养基贮存于冷暗处备用。临用时，加热融化储备培养基，待冷至６０℃左右，根据烧瓶内培养基的容量，加入一定量的已灭菌的２％伊红水溶液和０５％美蓝水溶液，充分摇匀（防止产生气泡），倾注平皿备用。Ａ２４ 乳糖蛋白胨培养液Ａ２４１ 成分蛋白胨１０ｇ牛肉膏３ｇ乳糖５ｇ氯化钠５ｇ１６％溴甲酚紫乙醇溶液１ｍｌ蒸馏水１０００ｍｌＡ２４２ 制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于１０００ｍｌ蒸馏水中，调整ｐＨ到７２～７４，加入１６％溴甲酚紫乙醇溶液１ｍｌ，充分混匀，分装于内有倒管的试管中。１１５℃灭菌２０ｍｉｎ。贮存于冷暗处备用。Ａ２５ 革兰氏染色液Ａ２５１ 结晶紫染色液结晶紫１ｇ９５％乙醇溶液２０ｍｌ１％草酸铵水溶液１０００ｍｌ将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵水溶液混合。Ａ２５２ 革兰氏碘液碘１ｇ碘化钾２ｇ蒸馏水３００ｍｌ将碘与碘化钾混合，加入蒸馏水少许，充分摇匀，待完全溶解，再加入蒸馏水至３００ｍｌ。Ａ２５３ 脱色液９５％乙醇。Ａ２５４ 沙黄复染液沙黄１ｇ９５％乙醇２ｇ蒸馏水９０ｍｌ将沙黄溶于９５％乙醇中，然后用蒸馏水稀释。Ａ２６ 染色法染色的基本步骤为１）涂片在载玻片上滴加一滴生理盐水，用灭菌的接种环取菌落少许，与生理盐水混匀，涂布成薄膜；２）干燥在室温中使自然干燥；３）固定将涂片迅速通过火焰２～３次，以载玻片反面接触皮肤，热而不烫为度；４）染色滴加结晶紫染色液，染色１ｍｉｎ，水洗；５）９ＧＢ１８４６６２００５媒染滴加革兰氏碘液，作用１ｍｉｎ，水洗；６）脱色滴加９５％乙醇脱色，约３０ｓ，水洗；７）复染滴加复染液，复染１ｍｉｎ，水洗。革兰氏阳性菌染色后呈紫色，革兰氏阴性菌染色后呈红色。注亦可用１∶１０稀释的石炭酸复红染色液做复染剂，复染时间为１０ｓ。Ａ３ 检验程序检验程序见图Ａ１。样品处理确定样品接种量发酵试验↓将样品接种于乳糖胆盐培养液４４℃、培养２４ｈ平板分离将产酸发酵管液接种于↓ＥＭＢ３７℃、培养１８～２４ｈ鉴定挑取可疑菌落革兰氏染色、↓镜检鉴定↓挑取革兰氏阴性无芽孢杆菌接种于乳糖蛋白胨培养液４４℃、培养２４ｈ计数根据产酸产气的阳性管数查ＭＰＮ↓表↓检验结果报告图Ａ１ 污水、污泥中粪大肠菌群检验程序Ａ４ 操作步骤Ａ４１ 样品准备Ａ４１１ 污水污水样品应至少取２００ｍｌ，使用前应充分混匀。根据预计的污水样品中粪大肠菌群数确定污水样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的接种量一般为１０、１、０１ｍｌ。粪大肠菌群数较多时接种量为１、０１、００１ｍｌ或０１、００１、０００１ｍｌ等。接种量少于１ｍｌ时，水样应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量为０１、００１ｍｌ时，取稀释比分别为１∶１０、１∶１００。其他接种量的稀释比依此类推。１∶１０稀释样品的制作方法为吸取１ｍｌ水样，注入到盛有９ｍｌ灭菌水的试管中，混匀，制成１∶１０稀释样品。因此，取１ｍｌ１∶１０稀释样品，等于取０１ｍｌ污水样品。其他稀释比的稀释样品同法制作。注１若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用５％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。Ａ４１２ 污泥污泥样品应至少取２００ｇ，使用前应充分混匀。根据预计的污泥样品中粪大肠菌群数量确定污泥样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的污泥样品接种量一般为０１、００１、０００１ｇ。粪大肠菌群数量较多时接种量为００１、０００１、００００１ｇ或０００１、００００１、０００００１ｇ等。污泥样品应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量０１、００１、０００１ｇ的稀释样品制作方法如下取２０ｇ污泥样品，加入到三角烧瓶中，加灭菌水使成２００ｍｌ，混匀，制成１∶１０稀释样品。吸取１∶１０稀释样品１ｍｌ，注入到盛有９ｍｌ灭菌水的试管中，混匀，制成１∶１００稀释样品。按同法制成１∶１０００稀释样品。接种１ｍｌ１∶１０、１∶１００、１∶１０００稀释样品等于接种０１、００１、０００１ｇ污泥样品。注１若样品为经过氯消毒的污泥，应在采样后立即用５％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。０１ＧＢ１８４６６２００５Ａ４２ 发酵试验将样品接种于装有乳糖胆盐培养液的试管（内有小倒管）中，４４℃培养２４ｈ。样品接种体积以及管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积根据以下条件确定样品为污水时，取三个接种量，每个接种量的样品分别接种于５个试管内，共需１５个试管。试管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积应根据接种量确定。若接种量为１０ｍｌ，吸取１０ｍｌ样品接种于装有５ｍｌ三倍浓度乳糖胆盐培养液的试管内；若接种量为１ｍｌ时，吸取１ｍｌ样品接种于装有１０ｍｌ普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内；若接种量少于１ｍｌ时，吸取１ｍｌ稀释样品接种于装有１０ｍｌ普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内。样品为污泥时，取三个接种量，每个接种量的稀释样品分别接种于３个试管内，共需９个试管。９个试管中，各装有１０ｍｌ乳糖胆盐培养液。各个试管接种稀释样品体积均为１ｍｌ。Ａ４３ 平板分离大肠杆菌分解乳糖产酸时培养液变色、产气时小倒管内出现气泡。经２４ｈ培养后，将产酸的试管内培养液分别划线接种于ＥＭＢ培养基上。置于３７℃培养箱中，培养１８～２４ｈ。Ａ４４ 鉴定挑选可疑粪大肠菌群菌落，进行革兰氏染色和镜检。可疑菌落有１）深紫黑色，具有金属光泽的菌落；２）紫黑色，不带或略带金屑光泽的菌落；３）淡紫红色，中心色较深的菌落。上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取上述典型菌落１～３个接种于盛有５ｍｌ乳糖蛋白胨培养液倒管和倒管的试管内，置于４４℃培养箱中培养２４ｈ。产酸产气试管为粪大肠菌群阳性管。Ａ５ 计数根据证实有粪大肠菌群存在的阳性管数，查表Ａ１或Ａ２可得１００ｍｌ污水或１ｇ污泥中粪大肠菌群ＭＰＮ值。由于表Ａ１和表Ａ２是按一定的三个１０倍浓度差接种量设计的（污水接种量为１０、１和０１ｍｌ，污泥接种量为０１、００１和０００１ｇ），当采用其他三个１０倍浓度差接种量时，需要修正表内ＭＰＮ值，具体方法如下表内所列污水（污泥）最大接种量增加１０倍时表内ＭＰＮ值相应降低１０倍；污水（污泥）最大接种量减少１０倍时表内ＭＰＮ值相应增加１０倍。如污水接种量改为１、０１和００１ｍｌ时，表Ａ１内ＭＰＮ值相应增加１０倍。其他的三个１０倍浓度差接种量的ＭＰＮ值相应类推。由于表Ａ１内ＭＰＮ值的单位为每１００ｍｌ污水样品中ＭＰＮ值，而污水以１Ｌ为报告单位，因此，需将查表Ａ１得到的ＭＰＮ值乘上１０，换算成１Ｌ污水样品中的ＭＰＮ值。表Ａ１ 污水中粪大肠菌群最可能数（ＭＰＮ）检索表（污水样品接种量为５份１０ｍｌ水样，５份１ｍｌ水样和５份０１ｍｌ水样）阳性管数接种１００ｍｌ水样接种１０ｍｌ水样接种０１ｍｌ水样每１００ｍｌ水样中ＭＰＮ阳性管数接种１００ｍｌ水样接种１０ｍｌ水样接种０１ｍｌ水样每１００ｍｌ水样中ＭＰＮ阳性管数接种１００ｍｌ水样接种１０ｍｌ水样接种０１ｍｌ水样每１００ｍｌ水样中ＭＰＮ００００２００５４００１３００１２２０１７４０１１７００２４２０２９４０２２１００３５２０３１２４０３２５００４７２０４１４４０４３０１１ＧＢ１８４６６２００５００５９２０５１６４０５３６续表阳性管数接种１００ｍｌ水样接种１０ｍｌ水样接种０１ｍｌ水样每１００ｍｌ水样中ＭＰＮ阳性管数接种１００ｍｌ水样接种１０ｍｌ水样接种０１ｍｌ水样每１００ｍｌ水样中ＭＰＮ阳性管数接种１００ｍｌ水样接种１０ｍｌ水样接种０１ｍｌ水样每１００ｍｌ水样中ＭＰＮ０１０２２１０７４１０１７０１１４２１１９４１１２１０１２６２１２１２４１２２６０１３７２１３１４１１３３１０１４９２１４１７４１４３６０１５１１２１５１９４１５４２０２０４２２０９４２０２２０２１６２２１１２４２１２６０２２７２２２１４４２２３２０２３９２２３１７４２３３８０２４１１２２４１９４２４４４０２５１３２２５２２４２５５００３０６２３０１２４３０２７０３１７２３１１４４３１３３０３２９２３２１７４３２３９０３３１１２３３２０４３３４５０３４１３２３４２２４３４５２０３５１５２３５２５４３５５９０４０８２４０１５４４０３４０４１９２４１１７４４１４００４２１１２４２２０４４２４７０４３１３２４３２３４４３５４０４４１５２４４２５４４４６２０４５１７２４５２８４４５６９０５０９２５０１７４５０４１０５１１１２５１２０４５１４８０５２１３２５２２３４５２５６０５３１５２５３２６４５３６４０５４１７２５４２９４５４７２０５５１９２５５３２４５５８１１００２３００８５００２３１０１４３０１１１５０１３１１０２６３０２１３５０２４３１０３８３０３１６５０３５８１０４１０３０４２０５０４７６１０５１２３０５２３５０５９５２１ＧＢ１８４６６２００５续表阳性管数接种１００ｍｌ水样接种１０ｍｌ水样接种０１ｍｌ水样每１００ｍｌ水样中ＭＰＮ阳性管数接种１００ｍｌ水样接种１０ｍｌ水样接种０１ｍｌ水样每１００ｍｌ水样中ＭＰＮ阳性管数接种１００ｍｌ水样接种１０ｍｌ水样接种０１ｍｌ水样每１００ｍｌ水样中ＭＰＮ１１０４３１０１１５１０３３１１１６３１１１４５１１４６１１２８３１２１７５１２６３１１３１０３１３２０５１３８４１１４１２３１４２３５１４１１０１１５１４３１５２７５１５１３０１２０６３２０１４５２０４９１２１８３２１１７５２１７０１２２１０３２２２０５２２９４１２３１２３２３２４５２３１２０１２４１５３２４２７５２４１５０１２５１７３２５３１５２５１８０１３０８３３０１７５３０７９１３１１０３３１２１５３１１１０１３２１２３３２２４５３２１４０１３３１５３３３２８５３３１８０１３４１７３３４３２５３４２１０１３５１９３３５３６５３５２５０１４０１１３４０２１５４０１３０１４１１３３４１２４５４１１７０１４２１５３４２２８５４２２２０１４３１７３４３３２５４３２８０１４４１９３４４３６５４４３５０１４５２２３４５４０５４５４３０１５０１３３５０２５５５０２４０１５１１５３５１２９５５１３５０１５２１７３５２３２５５２５４０１５３１９３５３３７５５３９２０１５４２２３５４４１５５４１６００１５５２４３５５４５５５５＞１６００３１ＧＢ１８４６６２００５表Ａ２ 污泥中粪大肠菌群最可能数（ＭＰＮ）检索表（污泥样品接种量为３份０１ｇ泥样，３份００１ｇ泥样和３份０００１ｇ泥样）阳性管数接种０１ｇ污样管接种００１ｇ污样管接种０００１ｇ污样管每１ｇ泥样中ＭＰＮ阳性管数接种０１ｇ污样管接种００１ｇ污样管接种０００１ｇ污样管每１ｇ泥样中ＭＰＮ阳性管数接种０１ｇ污样管接种００１ｇ污样管接种０００１ｇ污样管每１ｇ泥样中ＭＰＮ０００＜３１２０１１３００２３００１３１２１１５３０１３９００２６１２２２０３０２６４００３９１２３２４３０３９５０１０３１３０１６３１０４３０１１６１１３１２０３１１７５０１２９２１３２２４３１２１２００１３１２１３３２９３１３１６００２０６２２００９１３２０９３０２１９３２０１１４３２１１５００２２１２２０２２０３２２２１００２３１６２０３２６３２３２９００３０９４２１０１５３３０２４００３１１３２１１２０３３１４６００３２１６２１２２７３３２１１０００３３１９２１３３４３３３＞１１００１００３６２２０２１１０１７２２２１２８１０２１１２２２３５１０３１５２２３４２１１０７３２３０２９１１１１１２３１３６１１２１５２３２４４１１３１９２３３５３Ａ６ 检验结果报告根据粪大肠菌群ＭＰＮ值，报告１Ｌ污水或１ｇ污泥样品中粪大肠菌群ＭＰＮ值。４１ＧＢ１８４６６２００５附 录 Ｂ（规范性附录）医疗机构污水和污泥中沙门氏菌的检验方法Ｂ１ 仪器和设备Ｂ１１ 高压蒸汽灭菌器。Ｂ１２ 干燥灭菌箱。Ｂ１３ 培养箱。Ｂ１４ 恒温水浴箱。Ｂ１５ 电炉。Ｂ１６ 天平。Ｂ１７ 灭菌平皿。Ｂ１８ 灭菌刻度吸管。Ｂ１９ 酒精灯。Ｂ２ 培养基和试剂Ｂ２１ 亚硒酸盐增菌液（ＳＦ增菌液）Ｂ２１１ 成分胰蛋白胨（或多价胨）１０ｇ磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ３）１６ｇ磷酸二氢钠（ＮａＨ２ＰＯ３）２５ｇ乳糖４ｇ亚硒酸氢钠４ｇ蒸馏水１０００ｍｌＢ２１２ 制